استخدام مصل الإبل العراقية كبديل كفوء عن مصل جنين البقري في الأوساط الزرعية النسيجية

رسالة ماجستير

اسم الباحث : سيناء جبوري محمد البازي

اسم المشرف : الأستاذ المساعد الدكتور هادي رسول حسن الأستاذ الدكتور ناهي يوسف ياسين

الكلمات المفتاحية :

الكلية : كلية التربية للعلوم الصرفة

الاختصاص : علوم الحياة/علم الحيوان

سنة نشر البحث : 2006

تحميل الملف : اضغط هنا لتحميل البحث

جاءت هذه الدراسة لتسلط الضوء على أستعمال مصل ذكور الإبل العراقية كبديل عن مصل جنين الأبقار في الأوساط الزرعية النسيجية .حيث شملت هذه الدراسة تنمية الخطوط الخلوية السرطانية (خط خلايا سرطان الحنجرة البشري Hep-2 و خط خلايا الغدد اللبنية الفأري AMN-3 و الخط الخلوي الطبيعي لجنين الجرذ REF) بأوساط حاوية على ثلاثة تراكيز من مصل الإبل (5%، 10%و15%) و بثلاثة أعمار (خمسة أشهر ، سنتين و ثلاث سنوات ) و لمدة سبعة أيام. و دراسة تأثيره على معدل نمو خلايا تلك الخطوط الخلوية و أطوار نموها(طور السكون Lag phase و طور اللوغارتمي Log phaseو طور الأنحدار Declinephase) من خلال دراسة فترات أطوار منحنيات النمو لها وفترة التضاعفPopulation Doubling Time (PDT) و مقارنتها بالتركيز (5%) من مصل البقري كسيطرة. كما درست أشكال الخلايا لتلك الخطوط الخلوية و قورنت بالسيطرة، و تمت أيضاً المقارنة بين تلك التراكيز الثلاثة و الأعمار الثلاثة لمصل الإبل.فضلا عن الدراسة الوراثية الخلوية لخلايا الخطوط الخلوية المعاملة بالتراكيز الثلاث من مصل الإبل و للعمر خمسة أشهر من خلال حساب معامل الأنقسام لها و دراسة الهيئة الكرموسومية لها ومقارنتها بالسيطرة.
كما د‘رس تأثير أربع تراكيز من مصل الإبل (5%، 10%،15%و20%) و بأعماره الثلاث في انقسام الخلايا اللمفاوية الطبيعية البشرية بأضافة العامل المشطر PHA من خلال حساب دليل الأنقسام الخلوي (MI) Mitotic Index ودليل التحسس الخلوي Blastocyte Index (BI) و مقارنته بالأوساط الحاوية على التراكيز الأربعة نفسها من مصل البقري و تركيز (20%) من البلازما البشري(وعدا كسيطرة) كما تمت المقارنة بين التراكيز الأربعة لمصل الإبل و بين أعماره الثلاثة.
أظهرت النتائج مايلي:
1. أن للأوساط الزرعية المزودة بمصل الإبل القدرة على تنمية الخطوط الخلوية السرطانية Hep-2 و AMN-3 و الخط الطبيعي REF الاأنه كان أقل كفاءةً من السيطرة المزودة بـ 5% من مصل البقري . و عند المقارنة بين تلك التراكيز لوحظ ان التركيز 15% لمصل الإبل و بعمر خمسة أشهر أفضل التراكيز المستخدمة في تنمية خطوط الخلايا السرطانية و الطبيعية مقارنة ببقية التراكيز و الأعمار ، و لاسيما عند الخط الخلوي REF.
2. وجد أن الخطوط السرطانية والطبيعية المنماة بالأوساط الحاوية على مصل الإبل لها أطوار السيطرة نفسها فيما عدا الأختلاف في أوقاته حسب التركيز وعمر مصل الإبل المستخدم حيث كانت أطول من السيطرة في طور Lag و أقل من السيطرة في طور Log وكذلك وجد أن طور Lag يقصر و يطول طور Log وتقصر فترة التضاعف PDTكلما أزداد تركيز المصل و قل عمر الحيوان .
3. أن طور الـDecline قد بدأ في أغلب المعاملات ومن ضمنها السيطرة عند نفس الوقت وعند أغلب الخطوط الخلوية المستخدمة في الدراسة . فكان أقرب عمر و تركيز من السيطرة عمر الخمسة أشهر و بتركيز 15% .
4. لوحظ ان الخط الخلوي الطبيعي REF أطول الخطوط الخلوية المستخدمة في طور Lag و اقصرها في طور Log كما تميزت بطول فترة التضاعف PDT عند جميع خلايا خط REF المعاملة بالتراكيز الثلاثة مصل الإبل بجميع أعماره المستخدمة في الدراسة فضلا عن السيطرة مقارنة ببقية الخطوط الخلوية المستخدمة في الدراسة.
5. وجد أن هناك ارتفاعاً معنوياً p<0.01 في عدد الخلايا اللمفاوية البشرية المنقسمة و المتحسسة المحفزة بالعامل المشطر PHA عند تنميتها بالتراكيز الأربعة من مصل الإبل و بأعماره الثلاثة مقارنة بالسيطرة. ألا أن هذا الأرتفاع تباين حسب عمر و تركيز مصل الإبل المستخدم فأزداد كلما زاد تركيز المصل وقل عمر الحيوان ، فكان اكثر الأعمار و التراكيز قدرةًعلى تنمية الخلايا اللمفاوية عمر الخمسة أشهر وبتركيز 20% .
6. لم يغير مصل الإبل من شكل خلايا الخطوط الخلوية السرطانية و الطبيعية المستخدمة في الدراسة و لا على الهيئة الكروموسومية .كما لم يؤثر على الهيئة الكروموسومية التركيبية و العددية للخلايا اللمفاوية الطبيعية البشرية.

The use of Iraqi Camel Serum as effective alternative for Fetal Calf Serum in the Tissue Culture Media

Summary

This study is designed to use Iraqi camel serum instead of fetal calf serum in the tissue culture media.
The study includes the propagation of cancer cell lines Human layrnx carcinoma (Hep-2) , Murine mammary adenocarcinoma (AMN-3) and normal cell line, Rat Embryo Fibroblast (REF) in media which contains three concentrations (5%,10% & 15%) male camel serum in three ages (five months , two years & five years) for seven days. In addition this study is extended to assess the effect of camel serum in growth rate , phases of cancer and normal cell growth curves by studying the period of each of these phases and PDT period in comparison with (5% bovine serum) as a control. Morphological pictures of these cell lines are described in comparison with control. The comparison is also conducted between the three concentrations and the three ages of camel serum . In addition to the Cytogenetic analysis is studied for these cell lines that are treated with three concentrations of camel serum in five month age by studying the Mitotic Index (MI) and Chromosomal profile in comparison with control.
One face of the study found the effect of four concentrations (5%,10%,15%&20%) from camel serum in three ages on the growth of normal human lymphocytes with mitogen (PHA) by measuring the (MI) and Blastocyte Index (BI) in comparison with the same four concentrations of bovine serum and 20% of human plasma(as a control). Comparison is conducted between the four concentrations of camel serum and the ages used in this study.
The results showed:
1. The camel serum can propagate cancer cell lines (Hep-2 , AMN-3) and normal cell line (REF), but less significant p<0.05 in comparison with control. 15% of camel serum in five month age showed that the best in propagating cancer and normal cell lines especially REF cell line.
2. The cancer and normal cell growth curves phases and PDT period , they revealed that there are no differences in the phases of growth curves between the former cell lines that are treated and non treated (control) with the three concentrations of camel serum in three ages , except in the periods of each phase that differed in concentrations and age of camel serum, so the treatments showed that the Lag Phase period is shortened and the Log. phase period is elongated with shorted in PDT period when the concentration of camel serum is increased and age of camel is decreased.also the Lag phase period is longer than control with shorter Log. phase period and longer PDT in comparison with the control.
3. The same Decline phase period showed in most cell lines that are treated with camel serum and with control.The five month age of camel serum in 15% concentration revealed that the nearest one to the control in period of phases and PDT.
4. normal cell line (REF) had the longer Lag phase with the short Log. phase and longer PDT period in comparison with the other cell lines that are used in this study.
5. The effect of four concentrations of camel serum in three ages on growth of human normal lymphocytes with mitogen (PHA) showed that the high significant effect p<0.01 in comparison with the control. The result also showed that 20% concentration in five month age is the best for normal lymphocytes growth,
6. Morphological pictures and Chromosomal analysis to the cell lines revealed that no differences between treatment and control. with no effect on the number and structure of chromosomes of human normal lymphocytes.