الكشف الكیمیائي النسیجي المناعي لعامل نخر الورم الفا وانترلوكین ٤ مع الكشف الجزیئي لبكتریا الملویه البوابیه في التھاب المراره الحصوي المزمن

رسالة ماجستير

اسم الباحث : بتول علي خورشید الربیعي

اسم المشرف : أ م .د .سوسن محمد جبار الحسناوي، ا.د. علي نایف عاصي

الكلمات المفتاحية :

الكلية : كلية الطب

الاختصاص : الاحياء المجهرية الطبية

سنة نشر البحث : 2020

تحميل الملف : اضغط هنا لتحميل البحث

الخلاصة

حصى المراره هي واحدة من أكثر الاضطرابات الهضمية انتشارًا والتي تعتبر عاملا مسبيًا لتحفيز (التهاب المرارة TNF-α حركيات الالتهابيه البادئه, تلعب دورًا مهما في ‎eu‏ الالتهاب. بينما الحركيات المضاده للالتهاب IL-4 له دور في تنشيط الخلايا البائية وتكاثر الخلايا التائية .بكتريا الملويه الوابيه هي أحد مسببات الأمراض البشرية التي تؤثر على أكثر من 50% من سكان العالم.بالاضافه الى ذلك تلعب دور في اضطرابات الجهاز الهضمي العلوي ؛ بما في ذلك حصوات المرارة. لذلك ‎قامت‏ هذه الدراسة بالكشف عن العلاقة بين الملويه البوابيه والتهاب المرارة في تطور تكوين حصوات المرارة. اجريت الدراسة الحالية على 95 مريض كانوا يراجعون في قسم الجراحة في مستشفى الحسين العام بمحافظة الناصرية. كانت مدة الدراسة من نوفمبر إلى ديسمبر 2018. ثم إخضاع جميع المرضى المشمولين لمقابلة لملء الاستبيان. تم تقسيم أنسجة المرارة إلى جزئين » تم حفظ القطع الأولى في 10% فورمالين لطمرها بالرافين لغرض التصبيغ النسيجي والكشف الكيميائي النسيجي المناعي.تم إدراج نوعين من الحركيات TNF-α و IL-4 كأجسام مضادة في عمل الكشف الكيميائي النسيجي المناعي.
تم جمع القطع الثانية من أنسجة المرارة وحفظها على الفور عن طريق التجميد في درجة حرارة -20 درجة مئوية من عمل RT-PCR. تم اجراء تقنية RT-PCR للكشف عن الملويه البوابيه على أساس تضخيم جين UreC في عينات المرارة بعد استئصال المرارة .أظهرت النتائج أن من بين 95 مريضًا للتعبير المناعي .
TNF-α كانت عالية » بينما كان التعبير IL-4 منخفضًا في التهاب المرارة. أيضا ء وجد أنه لم يكن هناك ارتباط كبير بين TNF-α و IL-4 بين مرضى الالتهاب الحصوي المزمن و الالتهاب الغير حصوي المزمن وهناك (ارتباط إيجابي) بين درجة الالتهاب و TNF-α . وكذلك »٠ هناك ارتباط إيجابي بين درجه الالتهاب و IL-4 في RT-PCR وجد (32.6%) إيجابية لجين الملويه البوابيه UreC أيضا، لم يكن هناك ارتباط كبير في التعبير TNF-α بين مجموعات بكتريا الملويه البوابيه الإيجابية والسلبية. بالترابط بين عدوى IL-4 وبكتريا الملويه البوابيه لم يتم العثور على ارتباط كبير بين المجموعات.
خلصت هذه النتائج إلى أن زيادة ‎ TNF-αو تقليل IL-4 في أنسجة المرارة لها دور في تطور امراضيه التحص الصفراوي. أكدت الدراسة الحالية أن وجود الملوية البوابية في الغشاء المخاطي في المرارة قد يشير إلى وجود خطر كبير لحدوث تحص صفراوي.

Immunohistochemical detection of TNF-α and IL-4 with molecular detection of Helicobacter pylori in chronic calculus cholecystitis

Abstract

cholelithiasis is one of the most prevalent digestive disorders which is
consider as causative agent to induce gallbladder inflammation (cholecystitis). TNF- α as Pro-inflammatory cytokines, play an important role in initiation of
inflammation. However, anti- inflammatory IL-4, is a pleotropic cytokine
stimulation of activated B-cell and T-cell proliferation. On other hand it is well
established that Helicobacter pylori has pathogenic role which may infected over
50% of people around world. In addition, it is known to induce gastrointestinal
disorders. So, this study has undertaken to reveal the relationship between H. pylori
and cholecystitis explaining development of gallstones formation.
Current study was performed on 95 patients which were clients in surgical
clinic in Al-Husain General Hospital at Al Nasiriyah province. Duration of study
was from November to December 2018. all included patients were subjected to
interview for filling questionnaire. gallbladder tissues have been divided in two
parts, first pieces were preserved in 10% formalin for embedding-paraffin section
procedure to conduct routine stain and immunohistochemical (IHC) protocol. Two
types of cytokines were included as antibodies in IHC protocol (TNF-α and IL4).
Second pieces of gallbladder tissue have been immediately collected and kept
by frozen in -20ºc for real time pcr protocol. Real-Time PCR technique was
performed for detection of Helicobacter pylori based on amplification UreC gene in
gall bladder samples after cholecystectomy.
Results showing Out of the 95 patient’s immunoexpression of TNF-α was
high while IL-4 had low expression in chronic calculus cholecystitis. Also, it has
been found that there was no significant correlation between TNF-α and IL-4 among
CCC and CAC patients and there is (positive correlation) between grading and TNF- I
α. as well as, there is positive correlation between grading and IL-4. In real time pcr
find (32.6%) were positive for H. pylori UreC gene.
Also, there was no significant association in TNF-α expression among
positive and negative H. pylori groups.
In association between IL-4 and H. pylori infection there was no
significant association was found between groups.
Taken together, these results concluded that increasing of localization of TNF-
α and decreasing of localization IL-4 in gallbladder tissues have role on developing
pathogenesis of cholelithiasis. Current study confirmed that The presence of H.
pylori in gallbladder mucosa might indicate a big risk for cholelithiasis