الكشف عن فعالية بعض المستخلصات النباتية الطبية في تثبيط نمو الفطريات المرضية المعزولة والمشخصة جزيئيا

رسالة ماجستير

اسم الباحث : رنا صباح عباس ضياء الدين

اسم المشرف : أ.م.د. زهير حميد عبود أ.د. بلقيس هادي هاشم

الكلمات المفتاحية :

الكلية : كلية العلوم

الاختصاص : علوم الحياة

سنة نشر البحث : 2024

تحميل الملف : اضغط هنا لتحميل البحث

الخلاصة

تضمنت الدراسة الحالية التعرف على أنواع الفطريات الممرضة للجلد والفم وإمكانية دراسة الفعالية التثبيطية لبعض المستخلصات النباتية ضد الأنواع الفطرية المعزولة وتم التوصل الى الاتي :
من مجموع 115 عينة سريرية شملت 56 عينة قشور جلدية 42 عينة شعر و2عينة اظافر ,15 عينة مسحة من الفم والتي والتي تم اخذها من مرضى يعانون من إصابات فطرية في الجلد والفم وكانوا من المراجعين لمستشفى الامام الحسن عليه السلام ومستشفى الأطفال التعليمي في محافظة كربلاء للمدة من كانون الأول 2022 ولغاية شهر أيار 2023 , تبين وجود الفطريات في 42 عينة (32 عينة جلدية و 10 عينات من الفم ) شخصت هذه الفطريات بالاعتماد على الصفات المظهرية والمجهرية وتم تأكيد التشخيص جزيئيا بأستخدام تفاعل البلمرة التسلسلي بوجود البادئات ITS5 و ITS4 التي نجحت في مضاعفة المنطقة ITS ( Internal transcrided spacer ) بلغت احجامه بين pb (870-510 ) وحدد لكل نوع رمز تسلسلي في قاعدة البينات Gen bank التابع للمركز الوطني لمعلومات التقنية الحيوية وهي على التوالي OQ999337.1 للفطر Trichophyton indotinea وoq978648.1 للفطر Trichophyton interdigetale وoq979238.1 للفطر Trichophyton mentagraphytesوOQ979239.1 للفطر Trichophyton mentagraphytesو Trichophyton mentagraphytes OQ979292.1 وor119458. للفطر Microsporum canisو OR083657.1 للفطرTrichophyton quinckeueam وor08591.1 لخميرة المبيضات Candida albicans .
تبعا لنوع المسبب المرضي صنفت الفطريات المعزولة ضمن مجموعتين ,مجموعة الفطريات الجلدية ومجموعة الخمائر سجلت اعلى نسبة للفطريات الجلدية اذ بلغت 76% وصنفت الفطريات ضمن جنسين Trichophyton و Microsporum ,وكان من بين الأنواع المشخصة الفطر Trichophyton mentagraphyteاذ سجل اعلى نسبة % 23.8 وتلاه النوع Microsporum canis بنسبة 19.4% والفطرين Trichophyton quinckeueam وTrichophyton indotineaبنسبة 14.2% وسجل الفطر Trichophyton interdigetale نسبة بلغت 4.7%,وقد تبين ان الفطر Trichophyton indotinea تم عزله وتشخيصه لأول مرة في محافظة كربلاء اما مجموعة الخمائر فقد سجل النوع Candida albicans نسبة بلغت 23.8% .
صنفت الإصابات الفطرية تبعا لموقع الإصابة الى شكلين سريرين هما السعفة (Tinea ) وداء المبيضات الفموي (Oral candidiasis )وكان من بين السعفات الأكثر تكرارا هي سعفة الراس ونسبتها 36.5% تلتها سعفة الوجه بنسبة 29.7% وسعفة الجسم بنسبة 15.6% وسعفة اليد 3.4% اما سعفة الاظافر فكانت النسبة 1.7% .
بخصوص تأثير الجنس على الإصابات الفطرية فقد أظهرت الدراسة ان اعلى إصابة بالفطريات الجلدية سجلت لدى الذكور بنسبة 80% مقارنة بالاناث 20% في حين كانت المبيضات للفم اعلى تكرارا نسبيا لدى الاناث اذ سجلت نسبة إصابة بلغت 53.3% مقارنة بالذكور46.6% ,كما وجد في الدراسة الحالية ان تكرار الإصابة بالفطريات سجلت لدى الفئة العمرية الأقل من عشر سنوات 53% وتلاه لدى الفئة العمرية 29-11 بنسبة بلغت 34.7%
لدراسة تاثير المستخلص المائي لازهار البابونج واوراق الاوليفيرا والبابونج والخروع وقشور الرمان ,على الفطريات المعزولة تم تحضير مستخلص مائي حار وأجريت عليها عدة كشوفات كيميائية للتعرف على نوعية المركبات الفعالة الموجودة فيها وتبين ان جميع المستخلصات تحتوي على العفصيات والكاربوهيدرات والكلايكوكسيدات والفينولات والفلافونيدات والصابونينات والكومارينات في حين وجدت الراتنجات والقلويدات في مستخلص أوراق الاوليفيرا والخروع والمورينكا وازهار البابونج في حين لم يسجل أي وجود للسترويدات والبروتينات في كافة المستخلصات المحضرة..
اثبتت الدراسة ان المستخلص المائي الحار لنبات عند التراكيز 10% و 15%, و25% وجود فعالية تثبيطية لنباتي الرمان والاوليفيرا تجاه كافة الأنواع الفطرية المختبرة وهذا التاثير يزداد بزيادة التركيز , اذ بلغت اعلى فعالية تثبيطية لمستخلص الرمان والاوليفيرا عند التركيز 25% اذ بلغت (30,45,50 ,37 42 ,43) % لكل من T. quinckeueam وt. Mentagraphytes وt. Indotinea و T. interdigetale و M.canis و C. albicans وبالنسبة لمستخلص الاوليفيرا سجل اعلى معدل تثبيط عند التركيز 25% أيضا اذ بلغت اقطار 63 ملم تجاه الفطر M.canis وتلاه 62 ملم تجاه الفطر albicans C. ثم 37 ملم تجاه الفطر mentagraphyte T. في حين سجلت اقل معدلات تثبيط عند التركيز 10% اذ بلغت لمستخلص الرمان(2,0,1,2,9,9.5 ) ملم تجاه الفطريات من mentagraphyte .T وt. Indotinea T. quinckeueam و T. interdigetale و M.canis و C. albicansاما بالنسبة لمستخلص نبات الاوليفيرا اقل معدلات تثبيط عند التركيز 10% والتي بلغت (2,1,1.5,1.5, 14, 16) ملم للفطريات من T. quinckeueam وt. Mentagraphytes وt. Indotinea و T. interdigetaleو M.canis و C. albicans على التوالي في حين لم يسجل فعالية تثبيطية للتركيز 5% تجاه جميع الأنواع الفطرية المختبرة .وبخصوص مستخلص نباتي البابونج والخروع فلم يسجلا ليضا أي فعالية تثبيطية عند جميع التراكيز المختبرة وتجاه كافة الأنواع الفطرية المختبرة.

Detecting the effectiveness of some medicinal plant extracts in growth of pathogenic fungi isolated and identified molecularly

abstract

The current study included identifying the type of fungi that are pathogenic to the skin and mouth and the possibility of studying the inhibitory effectiveness of some plant extract against isolated fungi species.The outcomes of the study reached that:
Out of total of 115 clinical samples ,56 skin samples included 42 hair sample ,2 nails, 15 mouth swab samples, which were taken from patients with fungi injuries to the skin and mouth . they were among the reviewers of imam Al- Hassan hospital ,and the childrens teaching hospital in Kerbala Governorate for the period from December 2022to May 2023 the presence of fungi found 42 samples (32 skin samples and 10 sample of the mou th ). These fungi were diagnosed based on the phenoscopic and microscopic qualities . the diagnosis was confirmed molecularly by use of polymerization sequence of prefixes ITS 4 and ITS 5 ,which succeed in doubling the area ITS(internal transcribed spacer ) it size were between (870-510)pb and each type was determinedby serial code in the database of the national center for biotechnology information which are respectively OQ999337.1 for Trichophyton indotineae,OQ978648.1for the fungus Trichophyton interdigetal and OQ979238.1 for Trichophyton mentographytes, and OQ979239.1 for Trichophyton mentographytes, and OQ979292.1 Trichophyton mentographytes and OR119758.1 fo rthe Microsporum canies and OR083657.1 for the Trichophyton qunickeium and OR085961.1 for Candida albicans.
According to the type of pathogen , the isolated fungi were classified into two group , the skin fungi group and the group of yeast ,recorded the highest percentage of skin fungi reaching 76% , and the fungi were classified into the genera Trichophyton and Microsporum .among the diagnosed species were Trichophyton mentographytesthe highest percentage was 23.8%,followed by the type Microsporum canies by 19.4% the fungi Trichophyton qunickeium and Trichophyton indotineae 14.2% and the Trichophyton interdigital recorded ratio of4.7%. it was found that the fungus Trichophyton indotineae was isolated and diagnosed the first time in Kerbala Governorate .as for the group of yeast ,the type Candida albicans recorded a percentage of 23.8%
Fungal infection ,according to the location of the injury , were calassified into two forms, namely tinea and oral candidiasis.a mong the most frequent ringwarm was tinea capitis which was 36% followed by tinea feaciei by 29.7%,tinea corporis by 15.6%and the tinea manum 3.4%while the tinea unguium was 1.7%
Recording the effect of sex on fungal infection , the study showed the highest infection of skin fungi was recorded in male by 80% compared to females 20%.while oral cadidasis was relatively higher frequency in females 53%.an infection rate was recorded 46.6%.
It was also found in the current study that the frequency of fungi infection was recorded in the age group less than ten years 53% followed by the age group 29-11 by 34%
To study the effect of the aqueous extract of peel of Punica granatum ,and leaves of Aloe vera and Ricinus commuis and flower of Matricaria chamomille ,on the isolated fungi , a hot water extract was prepared and several chemical examination were conducted in it . it was found that all extract contain stellans ,carbohydrates ,glycoxides ,phenols and comarins .while resins were found in the leaf extract of Aleo vera Castor and Chamomile flowers, while no presence of steroids and proteins was recorded in all prepared extract.
The study proved that the aqueous extract of the Pomegranate plant and Aloe vera was highly effective against pathogenic fungi , the concentration recorded 25%with the highest rate inhibition diameter comparedto the rest of the concentration (5 ,10 , 15, 20 )% which give a rate of inhibition ,but the hot water extract to the Pomegranate plant at the concentration gave 25% high inhibitory effectiveness. The fungus Trichophyton indotineae recorded the highest inhibition rate which reached 50 mm and Trichophyton quninckaum 30mm , at the same concentration , while recorded very little inhibition recorded at concentration 5%.the Aleo vera plant also give high inhibition result and at the concentration 25%where the fungi recorded the highest inhibition rate reaching 63mm and the least the fungus Trichophyton quninckaum,which record 15 mm ,also gave few inhibition result with a concetration of 5%.
As for the plants of Chamomile and Castor they did not record any inhibition even at the concentration of 25%.