المعالجة الأحيائية لسم الزيرالينون المفرز من قبل الفطر Fusarium verticillioides الملوث لحبوب الذرة الصفراء بإستخدام البكتريا Bacillus subtilis و Lactobacillus plantarum

رسالة ماجستير

اسم الباحث : نور الهدى عبد المنعم العبودي

الكلية : كلية الزراعة

الاختصاص : العلوم الزراعية

سنة نشر البحث : 2018

تحميل الملف : اضغط هنا لتحميل البحث

   هدفت هذه الدرسة الى عزل البكتريا المتواجدة في عينات من اللبن أكتيفيا وتقييم كفاءتها في تحطيم سم الزيرالينون في الزجاج (In vitro) ومن ثم أختيار فعالية أحدى العزلات البكتيرية الأكفأ في تحطيم السم خارجياً و في خفض سمية الزيرالينون داخل الجسم الحي (In vivo)

أوضحت نتائج العزل والتشخيص ظهور الجنس Aspergillus spp. وبنسبة ظهور بلغت %96 وجاء الفطر Fusarium spp. بالمرتبة الثالثة بنسبة ظهور بلغت %32.

وبينت نتائج الكشف عن قابلية عزلات الفطر Fusarium spp. على إنتاج سم الزيرالينون بإستخدام تقنية صفائح الكروماتوغرافيا Thin Layer Chromatography(TLC) وبنسبة %72.2.

وتم تأكيد تشخيص العزلات المنتجة لسم الزيرالينون بإستخدام تقنية تفاعل البلمرة المتسلسل Polymerase chain reaction(PCR) كما أثبتت نتائج تحليل التتابع النيوكليوتيدي لحزمة الحامض النووي المضاعفة إن العزلات المنتجة تعود لنوع الفطر Fusarium verticillioides. وهذه العزلة كانت متطابقة بنسبة 100% مع العزلة WSF14-SW82 والتي تم تشخيصها في الولايات المتحدة.

من جانب أخر تم عزل وتشخيص 3 أنواع بكتيرية من اللبن وهي الـ Lactobacillus plantarum والـ Lactobacillus rhamnosus والـ Streptococcus thermophilus.

فضلاً عن دراسة فعالية بكتريا الـ Bacillus subtilis في حماية حبوب الذرة الصفراء من الأصابة بالفطر Fusarium verticillioides في ظروف الخزن الطبيعية اذ إنخفضت نسبة الأصابة من %100 في الحبوب المعاملة بالفطر فقط الى %48.88 بعد مرور ثلاثة أشهر خزن الحبوب, في حين لم تبدي بكتريا L.plantarum حماية لحبوب الذرة الصفراء من الأصابة بالفطر F.verticillioides.

وأظهرت بكتريا الـ L.plantarum فعالية كبيرة في أختزال سمية (سم الزيرالينون) خارجيا(In vitro) اذ أختفى تألق بقعة السم الذي تمت معالجته بالبكتريا من على لوحة صفائح الكروماتوغرافيا الرقيقة Thin Layer Chromatography(TLC)  عند تعريضها الى الأشعة فوق البنفسجية عند طول موجي  360نانومتر, بعد ذلك تم تعزيز هذه النتيجة بنتائج الأختبارات الحيوية داخل جسم حيوانات الجرذ الأبيض والتي تمت معاملتها بلقاح بكتريا الـ L.plantarum واللبن كلا على انفراد متبوعا بسم الزيرالينون. اذ كانت نتائج معايير الدم الفسيولوجية سليمة تماما في حين كانت هناك تغايرات مرضية واضحة لدى الحيوانات التي تمت معاملتها بسم الزيرالينون فقط .اذ كانت اعداد كريات الدم الحمراء في معاملة البكتريا والسم واللبن والسم106X6.66 كرية/ملم 3و106X6.83كرية/ملم3 على التوالي في حين إنخفضت أعدادها في معاملة السم فقط إذ بلغت 106X4.81كرية/ملم3 كما بلغت أعداد الخلايا اللمفية في معاملة البكتريا والسم واللبن والسم الى 103X10.13خلية/ملم  3و103X10.17خلية/ملم3 على التوالي وتراجعت أعدادها في معاملة السم فقط الى 103X7.74 خلية/ملم3  وأحدث سم الزيرالينون خفض واضح في كمية الهيموغلوبين(Hb) في دم الحيوانات المعاملة بسم الزيرالينون فقط إذ بلغت 8.5 غم/100مل وكان لبكتريا L.plantarum واللبن دور مهم في المحافظة على مستويات الهيموغلوبين الطبيعية في دم الحيوانات المعاملة بكل منها على حدة متبوعا بسم الزيرالينون إذ بلغت كميتها 14.06 غم100/مل و13.47غم100/مل على التوالي.

كما وبينت النتائج قدرة بكتريا الـ L.plantarum على حماية أنسجة الحيوانات المعاملة بها والتي تم تجريعها بسم الزيرلينون بعد ذلك اذ أظهرت نتائج الفحص النسيجي للمقاطع النسيجية لأعضاء القلب والأمعاء والكبد والكلى والطحال سلامتها من اي حالة مرضية في حين ظهرت تغيرات مرضية واضحة في جميع أنسجة تلك الأعضاء في الحيوانات المعاملة بسم الزيرالينون فقط.

Preparation and Characterization of Nanohybrid Antibiotic from Levofloxacin and Evaluation its Inhibitory Efficiency against Bacteria Isolated from Diabetic Foot Ulcer

         This study aimed to isolate the bacteria thats found in dairy and evaluate their activity in detoxification of zearalenone toxin(In vitro) and then select the the most efficenceone of bacteria in detoxification and reducing zearalenone toxicity (In vivo)

         Isolation and diagnosiste identificalt tests showed Aspergillus spp. and Fusarium spp. appearance were 96% and  32% respectively.

         Also results of Fusarium spp.  have ability to produce test on the production of zearalenone toxin by Thin layer chromatography(TLC) appeared at rate by 72.22%.

         diagnosis of isolates produced by zearalenone was using polymerase chain reaction (PCR). The results of the nucleotide sequence analysis of the double nucleic acid package showed that the isolates produced were due to Fusarium verticillioides.On the other side three bacterial types of dairy were isolated and diagnosed were Lactobacillus plantarum,Lactobacillus rhamnosus and Streptococcus thermophilus.As well as study of activity  of bacteria Bacillus subtilis in protection of yellow maize seeds from F.verticillioides under natural storage percentage of from 100% infecton to 48.88%for seeds treated with fungus after storage period for three months   .          L.plantarumshowed activity in reducing the toxicity of zearalenone externally(In vitro)when shine spotsof toxin zearalenon disappearedthats treatedpreviously with bacteriaby test of plateThin layer chromatography(TLC) and exposed to UV at a 360nm wavelength, then it was strengthned  this result by in vivo bio assay of albino male Rats and the transactionof zearalenone pre-treated with bacteriaL.plantarum and dairy.The physiological blood parameters were completely healthy but showed clear variances in the physiological blood parameters in animals treated with zearalenone only. The count of red blood cell in the treatment  bacteria and toxin,dairy and toxin 6.66×106 cell/mm3and 6.83×106 cell/mm3 respectively. While its numbers decreased in the treatment of toxin only,reached 4.81×106 cell/mm3The number of lymphocytes in the treatment of bacteria and toxin, dairy and toxin 10.13×103 cell/mm3 and 10.17×103 cell/mm3 respectively and their numbers in the toxin treatment decreased to 7.74×103 cell/mm3the most recent zearalenone toxin reduced the amount of hemoglobin(Hb) in the blood of animals treated with the toxin zearalenone only at 8.5 g/100ml. There were important role ofL.plantarum and dairy in maintaining normal hemoglobin levels in animals,which treated individual then followed by the toxin zearalenone ,amount at 14.06 g/100ml and 13.47 g/100ml respectively.The results explained the ability of L. plantarum bacteria to protect the tissues of treated animals, which were Oraldosage with the toxin zearalenone after that results of the histological examination of tissue sections for the organs hncludedheart, intestines, liver, kidney and spleen safety of any disease, while showed clear changes in all of these tissues Members of animals treated with the toxin zearalenone only.