تأثير الاستروجين النباتي في بعض المعايير الفسيولوجية والنسجية والوراثية لإناث الارانب المستحث فيها هشاشة العظام

اطروحة دكتوراه

اسم الباحث : غصون غانم كعيم

الكلية : كلية التربية للعلوم الصرفة

الاختصاص : علوم الحياة/علم الحيوان

سنة نشر البحث : 2014

تحميل الملف : اضغط هنا لتحميل البحث

   اجريت هذه الدراسة لمعرفة تأثير الجرعة المؤثرةED50   للاستروجين النباتي phytoestrogen) )   المستخلص من حبوب الفاصولياء البيضاء الجافة على فعالية خلايا بانية العظم Osteoblast من خلال دراسة بعض المعاييرالوظيفية والوراثية في اناث الارانب المستحث فيهاهشاشة العظام Osteoporosis بازالة المبايض الثنائي واعتبرت العينة داخل الجسم(in vivo )وبعض المعايير الوراثية في الوسط الزرعي لخلايا بانية العظم خارج الجسم (in vitro ).

بعد استخلاص الاستروجين النباتي من الفاصوليا البيضاء ،ثم استخراج الجرعة المؤثرة

ED50 . صممت تجربة لايجاد الجرعة المؤثرة ED50 للاستروجين النباتي وذلك با لتوزيع العشوائي ل48 من اناث الارانب الى ستة مجاميع (8 / مجموعة) حقنت المجموعة الاولى بالمحلول الملحي واستخدمت مجموعة سيطرة (G1 ) فيما حقنت عضليا المجموعة الثانية 0.07 ملغم / كغم من الاستروجين النباتي (G2 ) والثالثة 0.1 mg/kg(G3 ) والرابعة 0.2 mg/kg ((G4 والخامسة 0.5 mg/kg (G5 )والسادسة 0.7 mg/kg (G6 ) يوميا ولمدة اربعة اسابيع.بعدها تم قياس بعض المعايير الوظيفية مثل (الكولسترول الكلي  Total Cholesterol(TC) و الشحوم البروتينية عالية الكثافةHigh lipoprotein density(HDL)  , وحددت الجرعة المؤثرة وكانت 0.2 mg/kg .

اما بالنسبة للتجربة الثالثة قسمت عشوائيا 32 من اناث الارانب (8 / مجموعة ) تركت المجموعة الاولى مجموعة سيطرة G1) ) وازيلت المبايض للمجموعة الثانية (G2 )وحقنت المجموعة الثالثة ب0.2 mg/kg من الاستروجين النباتي بدون ازالة المبايض لها (G3 )وعولجت المجموعة الرابعة بالجرعة المؤثرة بعد ازالة المبايض (G4 ).

وبعد اجراء بعض المعايير الوظيفية لوحظت النتائج التالية:-

-1 في مجموعة الحيوانات مزالة المبايض ولمدة ستة اشهر لوحظ انخفاضا معنويا (P<0.05) في مستوى هرمون الاستروجين Estrogen(E) ومستوى الكلوتاثيون المختزل    Glutathion(GSH) والفسفور P ((Phosphour  في مصل الدم بينما لوحظ زيادة معنوية (P<0.05)  في مستوى هرمون المحفز للجريبات Follicle- stimulating hormones((FSHوLH ومستوى MDA ومستوى تركيز الكالسيوم Ca ومستوى فعالية Alkaline Phosphate (ALP)بالمقارنة مع باقي المجاميع.

-2 مجموعة الحيوانات مزالة المبايض وعولجت بعد مرور ستة اشهر (G4 ) لوحظ زيادة معنوية (P<0.05)    في مستوى الاستروجين E وGSH و p و انخفاضا معنويا (P<0.05) في FSH وLH وMDAوCaوALP بالمقارنة مع مجموعة مزالة المبايض G2 .

-3 مجموعة الحيوانات التي عوملت دون ازالة المبايض G3 فقد  لوحظ زيادة معنوية (P<0.05)  في مستوى E وGSH و p ،وانخفاضا معنويا (P<0.05) في MDA وCa وALP ،بالمقارنة مع مجموعة الحيوانات مزالة المبايض G2 ومجموعة G4.

-4 بالنسبة للدراسة النسيجية لوحظ تدهور في النسيج العظمي بزيادة الفراغات في متن النسيج العظمي وتطاول في قنوات فولكمان واما بالنسبة لنسيج الرحم تفكك للطبقات الداخلية للرحم وقلة في التغذية الرحمية واختزال في الغدد الرحمية بمجموعة الاناث مزالة المبايض .وعند حقن الجرعة المؤثرة للاستروجين النباتي لوحظ قلة في تدهور النسيج العظمي والرحم.

بالاضافة الى دراسة التغيرات في التعبير الجيني في المادة الوراثية لجينات الفايبرونكتين Fibronectin والكولاجين نوع  I  Collagen typeوالمستقبل Receptor for activation of nuclear factor kappa B (RANK) في الوسط الزرعي بالزراعة النسيجية    (in vitro ) خارج الجسم وكذلك في داخل جسم الكائن الحي (in vivo ) في الخلية العظمية .

-5 اظهرت نتائج الدراسة الوراثية للتعبير الجيني العالي الواضح لجينات Collagen type I والفايبرونكتين  Fibronectin لمجموعة الحيوانات مزالة المبايض والمعالجة والتي حقنت دون ازالة المبايض . بنما لم تظهر النتائج فروق معنوية لجينات مستقبل Receptor for activation of nuclear factor kappa B (RANK)  .

اما بالنسبة للجزء الثاني من الدراسة والمتضمن دراسة الفعالية الحيوية لخلايا العظم بعد المعاملة بالاستروجين النباتي على الوسط الزرعي لخلايا بانية العظم ،تم تقدير تركيز الاستروجين المؤثر على حيوية الخلية العظمية وباستخدام تراكيز تصاعدية(400,200,100,50,25,12.5 ) مايكروغرام / مل. ولمدة 24 ،48 ،72 ساعة .وجد تركيز 50 مايكروغرام هو الاكثر فعالية واقل سمية . ولكن بينت الدراسة ان تاثير جرعة 25 مايكروغرام كانت الاكثر فعالية في تنشيط جينات انتاج الكولاجين .اما بالنسبة لدراسة تأثير الاستروجين النباتي على فعالية الجينات الكولاجين والفايبرونكتين لوحظ زيادة لنشاط الخلايا العظمية وهي الكولاجين وهي الجينات المسؤلة عن بناء المادة البينية للنسيج العظمي وكذلك بعض الجينات المسؤلة عن  بناء بروتينات غشاء الخلية التى تعمل على التصاق الخلايا العظمية بالمادة البينية  Fibronectin وان هذه الجينات تقلل من عملية الموت المبرمج للخلايا .

نستنتج من الدراسة الحالية ان الجرعة المؤثرةED50   للاستروجين النباتي phytoestrogen) )   المستخلص من حبوب الفاصولياء البيضاء الجافة له تأثير ايجابي على النسيج العظمي (in vivo ) وخاصة خلايا بانية العظم (in vitro ).

Effect of phytoestrogen in some functional and histological and genetic parameters in the female rabbits which nduced osteoporosis

    This study was conducted to determine the impact of effective dose ED50 estrogenic plant (phytoestrogen)) extracted from the beans, white beans dry on the effectiveness of osteoblasts cells through the study of some physiology parameters in female rabbits induced by Osteoporosis by bilateral removal of the ovaries .

In addition to study the resulting changes in the genetic material of genes Fibronectin and Collagen Type I and future Receptor for activation of nuclear factor kappa B (RANK) in artificial (in vitro) and within the body of the organism (in vivo) in bone cell .

          After extraction plant estrogens from white beans , then extract the effective doseED50. Designed an experiment to find effective dose ED50 estrogenic plant and that by the distribution of random for 80 female rabbits into six groups (8 / group ) were injected first group saline solution and used a control (G) with injected intramuscularly second group 0.07 mg / kg of plant estrogens (G1) and the third 0.1 mg / kg (G2) and the fourth 0.2 mg / kg ((G3) and the fifth 0.5 mg / kg (G4) and sixth 0.7 mg / kg (G5) daily for four weeks . then was measured some occupational standards (such as total Cholesterol ( TC), high lipoprotein density (HDL), Malondialdehyde (MDA) and Glutathion (GSH) and identified the effective dose was 0.2 mg / kg.

           As for the experience of the second randomly divided 32 female rabbits (8 / group ) left the first group control group (            G1))and removed the ovaries of the second group (G2) and injected into the third set to 0.2 mg / kg of plant estrogens without removing the ovaries have (G3) and treated Group IV with effective dose of (phytoestrogen)  after the removal of the ovaries (G4).

              After some physiological parameters observed the following results : –

-1-In the group of animals removed ovaries and for a period of six months, observed a significant decrease (P <0.05) in the level of Estrogen (E) and the level of Glutathion (GSH) and phosphorus P in serum while observed a significant increase (P <0.05) at the level of the follicle-stimulating hormones ((FSH and LH and the level of MDA and the level of calcium concentration and the level of effectiveness of Ca Alkaline Phosphate (ALP) in comparison with the rest of the groups.

 

 

2- Group of animals removed ovaries and treated after six months (G4) observed a significant increase (P <0.05) in the level of estrogen E and GSH and p and a significant decrease (P <0.05) in FSH and LH and MDA and Ca and ALP compared with the group removed the ovaries G2.

3- Group of animals that were treated without removal of the ovaries G3 has been observed observed a significant increase (P <0.05) in the level of E and GSH and p, and a significant decrease (P <0.05) in the MDA and Ca and ALP, compared with a group of animals removed ovaries G2 and group G4.

4- For the study of histological observed deterioration in bone tissue with increase of the spaces in the body of bone tissue and affect the channels Volkmann and As for the tissue of the uterus Dissociation of the layers interior of the uterus and low in nutrition uterine and reduction in lymph uterine group of female removed the ovaries . while when injection  the effective dose of phytoestrogen observed lack of deterioration of bone tissue and the uterus.

5- Study results showed the genetic control of gene expression of genes clearly higher Collagen type I and Fibronectin group of animals removed ovaries , treatment and injected without removal of the ovaries . while results did not show significant differences for the future of the genes Receptor for activation of nuclear factor kappa B (RANK).

As for the second part of the study , which includes the study of biological activity of the cells of the bone after treatment estrogen plant , was estimated concentration of estrogen affecting the vital cell of bone and using concentrations upward ( 12.5 0.25 50, 100 200 400 , micrograms / ml) for a period of 24.48 0.72 hours. concentration of 50 micrograms found is the most effective and less toxic . But the study showed that the effect of dose of 25 micrograms was the most effective in activating genes that produce collagen . Either to study the effect of plant estrogens on the effectiveness of genes collagen and fibronectin observed increase of the activity of bone cells , a collagen , a gene responsible for a building material intra- tissue bone , as well as

Some of the genes responsible for a building cell membrane proteins that work on the adhesion of bone cells to Article interfaces Fibronectin and that these genes reduces the process of programmed cell death .