تاثير المستخلص المائي والكحولي لنبات القرنفل ومنظمات النمو النباتية والتداخل بينهما ضد بعض الفطريات المعزولة من بعض المواد الغذائية

رسالة ماجستير

اسم الباحث : منى جابر نعمة

اسم المشرف : أ.م.د بان موسى حسن الزبيدي

الكلمات المفتاحية :

الكلية : كلية التربية للعلوم الصرفة

الاختصاص : علوم الحياة-النبات-الفطريات

سنة نشر البحث : 2022

تحميل الملف : اضغط هنا لتحميل البحث

الخلاصة
هدفت هذه الدراسة الى عزل وتشخيص الفطريات المنتجة للسموم الفطرية من بعض المواد الغذائية في محافظة كربلاء .أجريت الدراسة في مختبرات كلية التربية للعلوم الصرفة للعام الدراسي 2021 – 2022 لغرض تقييم فعالية المستخلصات المائية والكحولية لنبات القرنفل ودراسة تاثير منظمي النمو النباتية Giberellic acid و Indol aacetic acid واجراء توليفة بين المستخلصات النباتية ومنظمات النمو على الفطريات المنتجة لسم الافلاتوكسين .
بينت نتائج عزل وتنقية الفطريات المرافقة للمواد الغذائية المكسرات و البقوليات واللحوم والالبان والخضروات والفواكه والاندومي والاجباس والبسكت والشعرية ومعجون الطماطة والسمسم والرز والمعكرونة والدخن والخبز التي عزلت من بعض المواد الغذائية المتداولة في الأسواق المحلية في مدينة كربلاء انها كانت ملوثة بالفطريات وان جميع الفطريات التي عزلت كانت منتجة لسم الافلاتوكسين اذ تم الاستدلال على ذلك باستخدام وسط جوز الهند مع محلول الامونيا .
شخصت الفطريات تشخيصا مظهريا و تشخيصا جزيئيا وذلك باستخدام تقنية Polymerase chain Reaction ( PCR) والتي نجحت في مضاعفة NS8 و NS1 مع البادئات (ITS) وقد تم استخدام نفس البادئات في تحديد تتابع القواعد النايتروجينية العائدة لrRNA التابعة للمركز الدولي لمعلومات التقانات Genbank National Center of Biotechnology Information ( NCBI) وقد تم إيداعها في قاعدة بيانات ( الفطريات الاحيائية).
وان الفطريات التي تم عزلها هي Penicillium oxalicum , Penicillium expansum , Aspergillus flavus , Cladosporium Uredinicola , Aspergillus sydowii , Aspergillus Oryzae , Aspergillus Tamarii , Aspergillus nomius , Alternaria triticina , Penicillium griseofulvum , Aspergillus austwicki , Aspergillus flavus , Cladosporium cladosporioides, Penicillium brevicompatum , Fusarium proleferatum , Aspergillus caespitosus , Aspergillus versicolor .وقد تم تسجيل جميع هذه العزلات بالبنك الجيني العالمي وقد أعطت لها ارقام تسلسلية .MT03303 ,AF033479 ,MZ35787 JN088229 , LC094427 , MH66405 , MT25485, MK45036 , JX418360 , MF03465 , OM72177 , MW51015 , MF47593, MT55892 , HQ44324 , KU866669 , MK64522 , MT49745 على التوالي وقد بينت النتائج أن هناك تشابه بنسبة 99 – 100٪ بين هذه العزلات والعزلات العالمية.
حسبت النسبة المئوية لظهور الانوع الفطرية المنتجة للسموم في العينات التي تم دراستها وكانت نسبة ظهور للفطر Aspergillus هي 55.56 % اذ ظهر في عشر عزلات ، اما الفطر Penicillium فظهر في اربع عزلات وكانت نسبة ظهوره 22.22 % ، اما نسبة ظهور الفطر Cladosporium فكانت 11.11% فقد ظهر في عزلتين فقط ، اما جنس الفطر Alternaria وجنس الفطر Fusarium فكانت نسبة ظهور كل منهما 5.56 % اذ ظهر كل منهما في عزلة واحدة . اما النسبة المئوية للتردد فقد تردد الفطر Aspergillus flavus ثلاث مرات من عزلات مختلفة وهي التفاح و الباذنجان والكاجو وكانت نسبة تردده 16.67 % ، اما بقية الأنواع العائدة لاجناس الفطريات فتردد كل نوع في عزلة واحدة وكانت نسبة ترددها 5.56 % .
استخدم المستخلصات الكحولية والمائية بالتراكيز 20 , 15 , 10 . 5 , 2.5 ملغم \مل لتقييم فاعلية المستخلصات في تثبيط الفطريات المشمولة بالدراسة وحساب النسبة المئوية وتحديد قيمة التركيز المثبط الأدنى . بينت نتائج التحليل الاحصائي تفوق المستخلص الكحولي على المستخلص المائي لنبات القرنفل وازدياد النسبة المئوية للتثبيط مع زيادة التركيز .
بينت الدراسة تاثير منظمي النمو في نمو الفطريات المدروسة اذ ظهر انخفاضا معنويا في قطر المستعمرة عند التراكيز 20 , 15 , 10 , 5 , 2.5 ملغم \مل ، وتحديد قيمة التركيز المثبط الأدنى ، كما بينت نتائج التحليل الاحصائي تفوق منظم النمو الاندول استك اسد من حيث القابلية التثبيطية على الجبرلين وازدياد النسبة المئوية للتثبيط مع زيادة التركيز .
أوضحت النتائج عدم فعالية التوليفة بين المستخلص المائي لنبات القرنفل و منظمات النمو في تثبيط الفطريات المدروسة وذلك بخلط التركيز المثبط الأدنى للمستخلص المائي 17،18 ، 19 ،20 ملغم \مل مع قيمة التركيز المثبط الأدنى لمنظمات النمو الجبرلين 17 ، 18 ، 19 ملغم \مل والاندول استك اسد 12 ، 13 ، 14 فكانت ذات فاعلية اقل في تثبيط الفطريات المنتجة لسم الافلاتوكسين مما يدل على ان قدرة كل من المستخلص المائي ومنظمات النمو على تثبيط نمو الفطريات المنتجة للسموم تكون اعلى في حال استخدامها كلا على حده .
أوضحت النتائج فعالية التوليفة بين المستخلص الكحولي لنبات القرنفل ومنظمات النمو في تثبيط الفطريات المنتجة للسموم وذلك بخلط التركيز المثبط الأدنى للمستخلص الكحولي 0.5 ، 1 ، 1.5 ، 2 ملغم \مل مع قيمة التركيز المثبط الأدنى لمنظمات النموالجبرلين 17 ، 18 ، 19 ملغم \مل ، والاندول استك اسد 12، 13 ، 14 ملغم \مل فكانت النتيجة الحصول على توليفة لها فاعلية عالية في تثبيط الفطريات المنتجة لسم الافلاتوكسين وبتراكيز اقل .
أوضحت نتائج الكشف عن المواد الفعالة لنبات القرنفل وجود عدد من المركبات الكيميائية الفعالة حيث أظهرت النتائج باحتواء براعم ازهار نبات القرنفل على كل من الفلافونات والكلايكوسيدات والفينولات والتربينات والرانتجات والزيوت الطيارة والصابونيات والسترويدات والفلويدات .

Effect of COQ2 Gene Polymorphism on incidence of myopathy in patients treated with atorvastatin in Kerbala ProvinceDepartment of Life Effect of

Summary:
This study aimed to isolate and identify fungi that produce mycotoxins from some foodstuffs in Karbala Governorate. The study was conducted in the laboratories of the College of Education for Pure Sciences for the academic year 2021-2022 for the purpose of evaluating the effectiveness of aqueous and alcoholic extracts of cloves, studying the effect of plant growth regulators Giberellic acid and Indol aacetic acid, and making a combination between plant extracts and growth regulators on aflatoxin-producing fungi.
The results of isolation and purification of fungi associated with foodstuffs, nuts, legumes, meat, dairy, vegetables, fruits, indomie, cheese, biscuits, noodles, tomato paste, sesame, rice, pasta, millet and bread, which were isolated from some foodstuffs traded in the local markets in the city of Karbala, showed that they were contaminated with fungi and that all the fungi that were isolated were Aflatoxin-producing, as evidenced by the use of coconut medium with ammonia solution.
Fungi were diagnosed phenotypically and molecularly by using Polymerase Chain Reaction (PCR) technique, which succeeded in duplicating NS8 and NS1 with primers (ITS). Biotechnology Information (NCBI) has been deposited in the Biofungi database.
The isolated fungi are Penicillium oxalicum, Penicillium Cladosporium Uredinicola expansum, Aspergillus flavus, Aspergillus sydowii, Aspergillus Oryzae, Aspergillus Tamarii, Aspergillus nomius, Alternaria triticina, Penicillium griseofulvum, Cladosporium. Aspergillus flavus Aspergillus austwicki Fusarium brevicompatum Penicillium cladosporioides, proleferatum, Aspergillus caespitosus, Aspergillus versicolor . All these snags have been recorded in the genetic bank and given funniest numbers ‎ .MT03303 ,AF033479 ,M235787 JN088229, LC094427 , MH66405, MT25485, MK45036, JX418360, MF03465 . OM72177, MW51015, MF47593, MT55892, HQ44324, KU866669 MK64522, MT49745. Respectively, the results showed that there is a similarity of 99-100% between these isolates and global isolates.
The percentage of occurrence of the toxin-producing country species was calculated in the samples that were studied, and the percentage of appearance of the fungus Aspergillus was 55.56%, as it appeared in ten isolates, while the fungus Penicillium appeared in four isolates and its percentage was 22.22%, while the percentage of appearance of the fungus Cladosporium was 11.11%. It appeared in only two isolates. As for the genus Alternaria and the genus Fusarium, the incidence rate for each of them was 5.56%, as each of them appeared in one isolate. As for the percentage of frequency, the fungus Aspergillus flavus was frequent three times from different isolates, which are apple, eggplant and cashew.
The frequency of cashews was 16.67%, while the rest of the species belonging to the genera of fungi, the frequency of each type in one isolate, and the frequency was 5.56%.
Alcoholic and aqueous extracts at concentrations of 20, 2,5,10,5,15 mg ml were used to evaluate the effectiveness of the extracts in inhibiting the fungi included in the study, calculate the percentage, and determine the value of the minimum inhibitory concentration. The results of the statistical analysis showed the superiority of the alcoholic extract over the aqueous extract of the clove plant, and the increase in the sperm count for perfusion with increasing concentration.
The study showed the effect of growth regulators on the growth of the studied fungi, as there was a significant decrease in the diameter of the colony at concentrations 20, 15, 2.5, 5, 10 mg ml, and determining the value of the minimum inhibitory concentration. Inhibitory susceptibility to gibberellins and the increase in the percentage of inhibition with increasing concentration.
The results showed the ineffectiveness of the combination between the German extract of clove plant and growth regulators in inhibiting the studied fungi by mixing the minimum inhibitory concentration of the aqueous extract 17, 18, 19, 20 mg ml with the minimum inhibitory concentration value of the growth regulators gibberellin 17, 18, 19 mg ml and indole acetate. Asad 12, 13, 14 were less effective in inhibiting aflatoxin-producing fungi, which indicates that the ability of each of the aqueous extract and growth regulators to inhibit the growth of toxin-producing fungi is higher if used separately.
The results showed the effectiveness of the combination between the alcoholic extract of cloves and growth regulators in inhibiting toxin-producing fungi by mixing the minimum inhibitory concentration of the alcoholic extract 0.5, 1, 1.5, 2 mg AML with the minimum inhibitory concentration value of the growth regulators gibberellin 17, 18, 19 mg AML, and indole acetate. Asad 12, 13, 14 mg amal, the result was a combination of high efficacy in inhibiting aflatoxin-producing fungi at lower concentrations.
The results of the detection of the active substances of the clove plant showed the presence of a number of effective chemical compounds, as the results showed that the flower buds of the clove stability contain all of the flavones, glycosides, phenols, terpenes, resins, volatile oils, saponins, steroids and fluids.