“دراسة الدورالوقائي للمستخلص المائي البارد لبذور نبات المورينجا اوليفيرا Moringa oleifera على بعض المعايير النسجية والوظيفية في ذكور الجرذان البيض المعاملة بعقار ليفوفلوكساسين”

رسالة ماجستير

اسم الباحث : وفية شاكر عبد الحسين الخفاجي

اسم المشرف : أ. د اشواق كاظم عبيد الطائي

الكلمات المفتاحية :

الكلية : كلية التربية للعلوم الصرفة

الاختصاص : علوم الحياة/علم الحيوان

سنة نشر البحث : 2022

تحميل الملف : اضغط هنا لتحميل البحث

هدفت الدراسة الحالية لمعرفة دراسة تأثيرالدورالوقائي للمستخلص المائي البارد لبذور نبات المورينجا أوليفيرا (M.o) Moringa oleifera وبتركيزين مختلفين ضد الأضرارالكبدية والكلوية التي يسببها عقارليفوفلوكساسين ( Levofloxacin (LFXفي ذكورالجرذان البيضاء وذلك عن طريق دراسة بعض التغيرات النسجية والمعاييرالوظيفية .
أجريت الدراسة في البيت الحيواني التابع لكلية الصيدلة / جامعة كربلاء ومختبرات كلية التربية للعلوم الصرفة – قسم علوم الحياة /جامعة كربلاء للفترة من بداية شهر ايلول2021 الى نهاية شهر شباط 2022 ، وتم استخدام 36 من ذكور الجرذ الابيض البالغة ، وزعت الجرذان عشوائياً الى ست مجاميع بواقع (6) حيوانات لكل مجموعة، تراوحت اوزانها (240-200) غم وأعمارها بين (14-12) أسبوع وجرعت فموياً لمدة 30 يوماً وعلى النحو التالي : (G1) المجموعة الأولى جرعت 1 مل ماء مقطر وعدت مجموعة سيطرة سالبة ،(G2) المجموعة الثانية جرعت بعقار ليفوفلوكساسين وبتركيز 10ملغم/كغم من وزن الجسم بعد اذابته بالماء المقطروعدت مجموعة سيطرة موجبة ،G3) وG4) المجموعتين الثالثة والرابعة جرعت بالمستخلص المائي لبذور المورينجا أوليفيرا وبتركيز 350)و650 ) ملغم/كغم من وزن الجسم على التوالي اما المجموعتين الخامسة والسادسة (G5،G6) فجرعت بالمستخلص المائي لبذور نبات المورينجا أوليفيرا وبتركيز(350،650) ملغم/كغم من وزن الجسم على التوالي قبل ساعتين من تجريعهم الليفوفلوكساسين وبتركيز 10ملغم/كغم من وزن الجسم ، تم التضحية بالحيوانات بعد انتهاء مدة التجربة 30 يوماً .
جمعت عينات الدم في المجاميع الستة بعد مرور شهر من التجريع واخذت مقاطع نسجية للكبد والكلية لغرض دراسة التغيرات النسجية عليها والتي تشمل قياس كلا من اقطارالخلايا الكبدية واقطارالجيبانيات واقطارالوريد المركزي ، وقياس اقطارالكبيبة والنبيب الملتوي الداني والقاصي ، وقيست المعايير الاتية : مستويات انزيمات الكبد ALP)) Alkalinephosphatas و Aspartate transaminase (AST)و(ALT) Alanine transaminase وتقدير معدل تركيز البروتين الكلي Total protein (T.P ) والالبومين Albumin (Alb.) والكلوبيولين (Globulin) ووظائف الكلى اليورياUrea) ) والكرياتنين (Creat.) Creatinine وقياس مستوى هرمون الإرثروبويتين Erythropoietin (EPO) ، والمالون ثنائي الديهايد (MDA) Malondialdehyde والكلوتاثيون glutathione (GSH) ، وقد حصلنا على النتائج التالية :
لقد أدى التجريع الفموي لذكور الجرذان بعقار ليفوفلوكساسين يومياً ولمدة 30 يوماً الى حدوث ارتفاع معنوي P≤0.05) ) في معدل مستوى انزيمات الكبد (AST، ALT ALP) واليوريا والكرياتنين و MDAانخفاض معنوي ≤0.05) P) في معدل مستوى البروتين الكلي والالبومين والكلوبيولين و EPOو GSH.
كذلك حدوث تغيرات نسجية في الكبد متمثلة بتوسع في الجيبانيات الكبدية واحتقان وتوسع في الوريد المركزي وعدم انتظام شديد للحبال الكبدية وتنخرالخلايا الكبدية واحتقان وتوسع كبير في الوريد البابي مع ارتشاح شديد للخلايا الالتهابية ، كما لوحظ وجود ارتفاع معنوي P≤0.05)) في معدل اقطار كل من الخلايا الكبدية والجيبانيات والوريد المركزي مقارنة بمجموعة السيطرة السالبة. اما التغيرات النسجية للكلية متمثلة بضمورشديد في الكبيبة وزيادة فسحة بومان وتحطم في النبيبات البولية مع وجود نزف دموي بين النبيبات الكلوية وتنخر في بطانة النبيبات الكلوية مع ارتشاح الخلايا الألتهابية مع وجود احتقان دموي وانسلاخ ظهارتها المبطنة، مع حدوث انخفاض معنوي (P≤0.05) في معدل اقطار كل من الكبيبة النبيب الملتوي الداني (القريب) والنبيب الملتوي القاصي (البعيد) مقارنة بمجموعة السيطرة السالبة (G1).
كما ادى التجريع الفموي للجرذان بالمستخلص المائي البارد لبذور المورينجا أوليفيرا Moringa oleifera في المجموعتين الثالثة والرابعة (G4،G3) يوميا ولمدة 30 يوم الى حصول تغيرات فسيولوجية للمعاييرالوظيفية متمثلة بحصول ارتفاع معنوي (P ≤0.05) في مستوى البروتين الكلي والكلوبيولين والكلوتاثيون للمجاميع (G3وG4) مقارنة مع مجموعة السيطرة السالبة والموجبة ، وحصول انخفاض معنوي (P ≤0.05) في مستوى المالون ثنائي الالديهايد وفي مستوى الانزيمات ALP) AST،ALT)، ومستوى اليوريا والكرياتنين وMAD في المجاميع (G3و(G4 مقارنة مع (G2) ، ووجود فروق معنوية لمعدل اقطار كل من الكبد والكلى لكلا المجموعتين ( G3و(G4 مقارنة مع مجموعة السيطرة السالبة.
واظهرالتجريع الفموي للجرذان بالمستخلص المائي البارد لبذورالمورينجا أوليفيرا في المجموعتين الخامسة والسادسة (G6،G5) حصول تغيرات فسيولوجية للمعاييرالوظيفية تمثلت بانخفاض معنوي(P ≤ 0.05) في مستوى انزيمات الكبد (ALT، AST، (ALPواليوريا والكرياتنين وMDA وارتفاع معنوي (P ≤ 0.05) في مستوى البروتين الكلي والكلوبيولين والالبومين وGSH وEPO مقارنة بمجموعة السيطرة الموجبة ( G2) .
اما التغيرات النسجية لنسيج الكبد في المجموعة الخامسة (G5) تمثلت بوجود الجيبانيات وتوسع واحتقان الوريد المركزي مع انتظام جزء من الحبال والخلايا الكبدية وتنكس بسيط في بعض الخلايا اما في المجموعة السادسة ((G6 يلاحظ فيها ان النسيج اقرب للطبيعي مع الوريد المركزي الطبيعي وانتظام الحبال الكبدية والخلايا الكبدية وانويتها مع توسع بسيط للجيبانيات حيث يظهر النسيج اقرب لمجموعة السيطرة السالبة (G1) اما معدل الأقطار لوحظ وجود انخفاض معنوي (P≤0.05) في المجموعتين لمعدل أقطار كل من الخلايا الكبدية والوريد المركزي والجيبانيات مقارنة مع مجموعة السيطرة الموجبة (G2) .اما فيما يخص نسيج الكلية تمثلت التغيرات النسجية في المجموعة الخامسة (G5) انكماش في الكبيبة وزيادة فسحة بومان مع البنية الطبيعية لبعض النبيبات اما المجموعة السادسة (G6) فلا يوجد ضرر واضح يلاحظ فيها الكبيبة والنسيج اقرب الى الطبيعي ووجود محفظة بومان وفسحة بومان مع البنية الطبيعية للنبيبات البولية القاصي والداني مع تنكس بسيط لبعض الخلايا مقارنة مع مجموعة السيطرة الموجبة (G2) والسالبة (G1) ، ووجود ارتفاع معنوي (P≤0.05) في معدل قطر كل من الكبيبة والنبيب الملتوي القريب والنبيب الملتوي البعيد مقارنة مع مجموعة السيطرة الموجبة (G2) وعلى التوالي .
نستنتج من الدراسة الحالية ان المستخلص المائي البارد لبذور نبات المورينجا أوليفيرا له القدرة في منع او تقليل السمية او التأثيرات الضارة الناتجة من تجريع ذكورالجرذان البيضاء بعقار ليفوفلوكساسين وكبح نشاط الجذورالحرة ومعادلة الاجهاد التأكسدي على نسيجي الكبد والكلى وبعض المعاييرالوظيفية من خلال خصائصه الحيوية ومكوناته الكيميائية الفعالة خاصةً المضادةللأكسدة.

Study of the protective role of cold aqueous extract of Moringa oleifera seeds on some histological and functional parameters in white male rats

Abstract
The present study aimed to know the effect of cold aqueous extract of Moringa oleifera (M.o) seed with two different concentrations against the liver and kidney damage caused by levofloxacin in male albino rats by studying some histological changes and physiological and biochemical parameters.
The study was carried out in the animal house of the College of Pharmacy / University of Karbala and the laboratories of the College of Education for Pure Sciences – Department of Life Sciences / University of Karbala for the period from the beginning of September 2021 to the end of February 2022, and 36 adult white male rats were used. Rats were randomly distributed into six groups with (6) Animals for each group, their weights ranged from (200-240) g and ages between (12-14) weeks, and they were dosed orally for 30 days as follows: (G1) The first group dosed 1 ml of distilled water, and the negative control group .The second group was dosed with levofloxacin at a concentration of 10 mg/kg of body weight after dissolving it with distilled water, and a positive control group, (G3, G4), the third and fourth groups were dosed with aqueous extract of Moringa oleifera seeds at a concentration of (350 and 650) mg/kg of body weight, respectively.The fifth and sixth groups(G5, G6) were dosed with aqueous extract of Moringa oleifera seeds at a concentration of (350, 650) mg/kg of body weight, respectively, two hours before levofloxacin and at a concentration of 10 mg/kg of body weight. Animals were sacrificed after the end of the experiment period 30 days .
Blood samples were collected in the six groups after one month of dosing, and tissue sections of the liver and kidney were taken For the purpose of studying histological changes on it, which includes measuring both the diameters of hepatocytes, the sinusoids, the diameters of the central vein, and measuring the diameters of the glomerulus and the proximal and distal convoluted tubules. The following parameters were measured: the levels of liver enzymes Alkalinephosphatases (ALP), Aspartate transaminase (AST) and Alanine transaminase (ALT), and estimation of the concentration of total protein (T.P), albumin (Alb.), and globulin. And kidney functions were urea, creatinine, and Erythropoietin (EPO), malondialdehyde (MDA) and glutathione (GSH), and we obtained the following results:
Oral administration of levofloxacin daily to male rats for 30 days led to a significant increase (P≤0.05) in the mean level of liver enzymes (AST,ALT, ALP), urea, creatinine and MDA, and a significant decrease (P<0.05) in the mean level of total protein, albumin, globulin , EPO and GSH compard with the negative control group.
As well as the occurrence of histological changes in the liver represented by the expansion of the hepatic sinusoids, congestion and expansion of the central vein, severe irregularity of the hepatic cords, necrosis of hepatocytes, congestion and large expansion of the portal vein with severe infiltration of inflammatory cells with significant increase (P≤0.05) in rate of the diameters of Hepatocytes, sinusoids, and central vein compared to the negative control group. As for the histological changes of the kidneys represented by severe atrophy in the glomerulus, an increase in Bowman’s space, and a breakdown in the urinary tubules, with the presence of hemorrhage between the renal tubules, necrosis in the lining of the renal tubules, infiltration of inflammatory cells, congestion and shedding of its lining epithelium, with a significant decrease (P≤0.05) in the rate of The diameters of both the glomerulus of the proximal (proximal) convoluted tubule and the distal convoluted tubule (distal) compared to the negative control group (G1).
Oral administration to rats with cold aqueous extract of Moringa oleifera seeds in the third and fourth groups (G4, G3) daily for 30 days led to physiological changes in the functional parameters represented by a significant increase (P ≤ 0.05) in the level of total protein, globulin and glutathione for groups (G3 , G4) compared with the negative and positive control group.and there was a significant decrease (P ≤0.05) in the level of malondialdehyde and in the level of enzymes (ALP، AST, ALT), and the level of urea, creatinine and MAD in groups (G3 , G4) compared with (G2), and there were significant differences in the mean diameters of the liver and kidneys for both groups (G3,G4) compared with the negative control group.
Oral dosing of rats with cold aqueous extract of Moringa oleifera seeds in the fifth and sixth groups (G6, G5) showed a significant decrease (P ≤0.05) in the level of liver enzymes (ALT, AST, ALP), urea, creatinine and MDA and a significant increase in (P ≤ 0.05) The level of total protein, globulin, albumin, GSH and EPO compared to the positive control group (G2).

As for the histological changes of the liver tissue in the fifth group (G5) it was represented by the presence of sinusoids, expansion and congestion of the central vein with the regularity of part of the cords and hepatocytes, and slight degeneration in some cells. The hepatocytes and their nuclei with a slight expansion of the sinusoids, where the tissue appears closer to the negative control group (G1), while the average diameters, a significant decrease (P≤0.05) was observed in the two groups for the average diameters of each of the hepatocytes, central vein and sinusoids compared with the positive control group (G2). With regard to the tissue of the kidney, the histological changes in the fifth group (G5) were a shrinkage of the glomerulus and an increase in Bowman’s space with the normal structure of some tubules. As for the sixth group (G6), there is no obvious damage in which the glomerulus is observed and the tissue is closer to normal and the presence of Bowman’s capsule and Bowman’s space with the normal structure of the tubules Distal and proximal urinary tract with slight degeneration of some cells compared with the positive (G2) and negative (G1) control group, and there was a significant increase (P ≤ 0.05) in the mean diameter of each glomerulus The proximal convoluted tubule and the distal convoluted tubule compared with the positive control group (G2), respectively.
We conclude from the current study that the cold aqueous extract of Moringa oleifera seeds has the ability to prevent or reduce the toxicity or harmful effects resulting from the administration of levofloxacin to male albino rats, Inhibition of free radical activity , neutralizing oxidative stress on liver and kidney tissues, and some functional parameters through its biological properties and chemical components. Especially effective as an antioxidant.