دراسة كيموحيوية لأنزيم اليوريكيز المنتج من Pseudomonas aeruginosa المعزولة محلياً

Biochemical Study of Uricase Enzyme Produced From Pseudomonas aeruginosa Local Isolate

Uricase enzyme  [ E. C. 1.7.3.3 ] from  oxidoreductase  enzymes , that  catalyses  the  oxidation  of  uric  acid , which  act  on  open  the  pyrimidines  ring  of  uric  acid .

The ability   of  15  bacterial  isolates  were  tested  to  production  uricase  enzyme , by  using  the  solid  and  submerged  culture  in  the  primary  and  secondary  screening .

The  isolate  P.aeruginosa 7   was  selected  for  it’s  best  in  production  of  enzyme . the  optimum  fermentation  condition  for  uricase  enzyme  production  by  P.  aeruginosa 7   were  examined . Results  showed  that  used  0.05%  syrup  dates  as  carbon  source, and  used  o.3%  from  uric  as  inducer , 0.75%  from  KH₂PO₄ , 0.1%  from  Mgcl_{2 .}

The  other  optimum  condition  for  production  of  uricase  enzyme  were  selected , the  optimum  pH  was  6.5  and  incubation  period  was  after  24  hrs. , and  the  optimum  temperature  37 C^{O .}

However  the  shaking  was  at  150  rpm , and  inoculum   volume  was  1  from  culture  volume . uricase  enzyme  was  purified  from  culture  filtrate  of  P. aeruginosa 7   by  two  steps  of  purification  techniques :

First  steps : ammonium  sulfate  70 %  saturation

The second step :  include  ion  exchange  chromatograpHy  on  DEAE – Cellulose . uricase  was  purified  by  7.2  fold  with  yield  43.79 % .

Uricase  showed  optimum  pH  (8.5 – 9) and  pH  stability  was  in  the  range of  (8 – 9.5) .  the  temperature  optimum  of  uricase  enzyme  was  35 C^o  . and  the  thermostable  for  uricase  enzyme  to  observe  that  the  enzyme  was  retain  reserved  by  perfect  activity  at  (25 – 40) C^o  and  for  20  min.

The  kinetic  of  uricase  enzyme  that  representation  by  K_m  and  V_max  was  investigation  and  to  be  whole  estimation   by  followed  by   three  method , the  rang  value  of  K_m  was  reached  to  0.0091 mg / ml  . However  the  V_max  was  reached  to  6.68 µM / ml . min. , by  using  the  uric  acid  as  a substrate .

The effective  of  some  metal  ion  was  studied  and  the  result  showed  that  the  NiCl , AgCl₂  and  HgCl  inhibiters  , and  added  to  this  using  1  mM from  FeCl₂  was  to  lose  88.93 % from  enzyme  activity . Whereas  NaCl  enhance  the  enzyme  activity  that  reached  to  216.448 % if  using 1 mM from  it , Mgcl₂ , CaCl₂ were  consider  enhancer  to  the  enzyme  activity  if  using  at  concentration  5 mM and  the  residue  activity  was  reached  to  (170.35 and  129.62) % respectively .

The  medical  application  for  uricase  enzyme  that  product  from  local  isolate  P. aeruginosa 7  was  studied  to  diagnosis  the  concentration  of  uric  acid  on the  blood . Through  using peroxidase  enzyme  that  extract  from  horseradish , and  the  result  showed  the  qualification  of  enzyme  to  detect  the  uric  acid  in  the  blood  through  comparative  it  with  the  stander  result  measuring  by  (RANDOX)  Kit .