دراسة نسيجية ووظيفية لتأثير إزالة المبايض في الغدة النخامية، والرحم والغدة اللبنية في الأرانب المحلية Oryctolagus cuniculus

اطروحة دكتوراه

اسم الباحث : أشواق كاظم عبيد الحجيري

الكلية : كلية التربية للعلوم الصرفة

الاختصاص : علوم الحياة/علم الحيوان

سنة نشر البحث : 2019

تحميل الملف : اضغط هنا لتحميل البحث

    أجريت الدراسة الحالية لمعرفة تأثير إزالة المبايض الاحادي والثنائي على الغدد اللبنية والرحم والغدة النخامية لإناث الأرانب Oryctolagus cuniculus. إذ قسمت عشوائيا 48 من إناث الأرانب الى مجموعتين (عذارى ومرضعات) ، كل مجموعة قسمت الى اربعة مجاميع (6/ مجموعة)، المجموعة الاولى تمثل مجموعة السيطرة sham ، والثانية تمثل مجموعة الازالة ثنائية المبايض و الثالثة تمثل مجموعة ازالة المبيض الايمن والرابعة مجموعة ازالة المبيض الايسر. تمت التضحية بالحيوانات بعد مدة شهر من عملية الازالة، وأخذت المقاطع النسجية من الغدد اللبنية والرحم والغدة النخامية لغرض دراسة التغيرات النسجية والكيمو نسجية والكيمو نسجية المناعية.

كما اخذت عينات الدم لقياس مستوى تركيز الاستروجين Estrogen والبروجستيرون Progesterone والبرولاكتين Prolactin وهرمون محفز للجريباتFollicle stimulating hormone والهرمون اللوتيني Luteinizing hormone ودراسة مستوى الهرمون اللوتيني LH في نسيج الغدة النخامية، وقياس تركيز مستوى الكلوتاثيون Glutathion GSH والمالونديالديهايد Malondialdehyde MDA في مصل الدم ، وقياس فعالية انزيمات الفوسفاتيز القاعدي Alkaline phosphatase و 5′  النيوكلوتايدز Nucleotidase- 5 في أنسجة الغدد اللبنية والرحم. ومن خلال هذه المعايير اظهرت النتائج التالية :

  • بينت المقاطع النسجية للغدد اللبنية المصبوغة بصبغة الهيماتوكسلين والايوسين في مجموعة الازالة الثنائية للعذارى قلة عدد الفصيصات والبراعم الحويصلية وكثيرا من النسيج الدهني مقارنة مع مجموعة السيطرة، اما بالنسبة للمرضعات فئن استئصال المبايض الكاملة يؤدي الى صغر حجم الفصيصات وكذلك كثرة الحويصلات غير الفعالة وكثرة السدى. أما في صبغة Trichrome للغدد اللبنية زيادة في كمية الالياف الكولاجينة لكل المجاميع المعاملة من العذارى والمرضعات مقارنة مع السيطرة. بينما في صبغة Periodic Acid Schiffs فكان الافراز موجبا للمجاميع الثلاث ومجموعة السيطرة في المرضعات ولم تظهر في مجموعة العذارى. اما فيما يخص معدل اقطار واعداد الحويصلات للغدد اللبنية فقذ ظهر انخفاض معنوي (0.05>p) في المجاميع المعاملة الثلاث للعذارى والمرضعات مقارنة مع مجموعة السيطرة.
  • أما المقاطع النسجية للرحم بصبغة الهيماتوكسلين والايوسين فقذ أظهرت الدراسة الحالية ان ازالة المبيضين يؤدي الى قلة سمك طبقات الرحم وضمورها وقلة طياتها وانعدام الغدد الرحمية مع وجود ارتشاح خلوي مقارنة مع المجاميع الاخرى للعذارى والمرضعات. وعند استخدام صبغة Trichrome ظهرت هنالك زيادة في الالياف الكولاجينية (السدى) لجميع المجاميع مقارنة مع مجموعة السيطرة. أما فيما يخص معدل سمك طبقات الرحم وبطانته فقذ ظهر انخفاض معنوي (0.05p<) في المجاميع الثلاث مقارنة مع مجموعة السيطرة sham)).
  • لم تظهر تغيراث مرضية نسجية واظحه باستخذام صبغة الهيماتومسلين والايوسين في نسيج الغدة النخامية وللمجاميع المعاملة الثلاثة للمرضعات والعذارى. فيما يحص الصبغة الخاصة بمستقبو البروجستيرون في خلايا المناسو لوحظ تضخمها في مجموعة الازالة الثنائية مع ظهور حويصلاث كبيرة في السايتوبلازم مقارنة مع المجاميع الاخرى.
  • أظهرت الدراسة الحالية لمستقبلات الاستروجين والبروجستيرون في نسجي الغدد اللبنية والرحم للعذارى والمرضعات ظهور تعبير ضعيف (+) وسالب (-) في نسجي الغدة اللبنية والرحم لمستقبلي الاستروجين والبروجستيرون في مجموعة الازالة الكاملة للعذارى ، وكان التعبير(+) في نسيج الغدد اللبنية لمستقبلي الاستروجين والبروجستيرون للمرضعات ، والتعبير(-) لمستقبل الاستروجين و (+) لمستقبل البروجستيرون في نسيج الرحم . أما في مجموعة ازالة المبيض الايمن فقذ ظهر التعبير (+ + +) (+ +) للعذارى والمرضعات لمستقبلي الاستروجين والبروجستيرون لنسجي الغدد اللبنية والرحم على التوالي. أما عند ازالة المبيض الايسر فقذ أظهرت تعبير (+ +) (+) لمستقبلي الاستروجين والبروجستيرون لنسجي الغدد اللبنية والرحم للعذارى والمرضعات.
  • وأظهرت نتائج الدراسة الحالية زيادة معنوية (0.05p<) في مستوى ترميض هرموني FSH وLH في مصل مجموعة الازالة الكاملة مقارنة مع المجاميع الاخرى للعذارى والمرضعات . كما لوحظ عدم وجود فرق معنوي في مستوى تركيز هرمون البرولاكتين في مصل المجاميع الثلاثة للعذارى ، بينما لوحظ ارتفاع معنوي (0.05p<) في مجموعة إزالة المبيض الايمن مقارنة مع المجاميع الاخرى للمرضعات. وانخفاض معنوي (0.05>p) في مستوى تركيز هرموني الاستروجين واليروجستيرون في مصل مجموعة الإزالة الكاملة بالمقارنة مع المجاميع الاخرى للعذارى والمرضعات.
  • بينت النتائج الحالية ارتفاع معنوي (0.05p<) في مستوى الهرمون اللوتيني في نسيج الغدة النخامية في مجموعة إزالة المبايض الكاملة للعذارى. بينما لوحظ ارتفاع غير معنوي في هرمون الوتيني LH في مجموعة المرضعات.
  • إما بالنسبة لتركيز أنزيم الفوسفاتيز القاعدي ALP فقد كان هناك انخفاض معنوي (0.05>P) في مجموعة إزالة المبايض الكاملة بالمقارنة مع مجاميع المزالة المبيض الايمن والايسر ومجموعة السيطرة لنسجي الغدد اللبنية والرحم للعذارى والمرضعات .بينما لوحظ انخفاض معنوي (0.05>p) في تركيز أنزيم ‘5 النيوكلوتايدز في مجموعة الإزالة الكاملة مقارنة مع المجاميع المعاملة ومجموعة السيطرة لتسجي القند اللبنية والرحم في العذارى والمرضعات.
  • أطهرت الدراسة الحالية انخفاضا معنويا (0.05p<) في مستوى تركيز GSH وارتفاعا معنويا (05>p) في مستوى تركيز MDA في مصل مجموعة الازالة الكاملة ومجموعة إزالة المبيض الايمن والايسر للعذارى والمرضعات مقارنة بمجموعة السيطرة.
  • ولم يلاحظ زيادة معنوية في معده وزُ الجسم للمجاميع المزالة المبايض للعذارى بالمقارنة مع مجموعة السيطرة، ييتما لوحظ ارتفاع معنوي (0.05>p) في المجاميع المعاملة للمرضعات.

يستنتج من الدراسة الحالية، ان عملية ازالة المبايض الثنائية للعذارى والمرضعات أدت الى تغيرات نسجية وكيمونسجية مناعية ووظيفية للغدد اللبنية والرحم والغدة النخامية في إناث الأرانب .

Study histological and physiological effects of Ovariectomy on pituitary, uterus and mammary gland in local rabbits.(Oryctolagus cuniculus)

    This study aimed to investigate the effect of bi- and uni- lateral ovariectomy on mammary gland, uterine tissues and pituitary gland in female rabbits Oryctolagus cuniculus. Forty eight animals were divided randomly into two groups, one of them at virgin stage and anther at lactating stage. Each group subdivided into four groups (control(sham)) the first group , second one (bilateral ovariectimized) group ,the third and fourth groups (left and right unilateral ovariectomized ) respectively , (6 rabbits in each group). Thereafter, the animals were sacrificed after a month of operation to provide mammary, uterine and pituitary tissues for the histological, histochemical ,imunohistochemical and morphometrical studies .
Blood samples were collected for biochemical tests including Estrogen , Progesterone , Prolactin , Follicle stimulating and Luteinizing hormones concentration and LH hormons concentration in pituitary tissue, Malondialdehyde and Reduced Glutathion in serum .The Alkaline phosphatase and 5 – Nucleotidase in mammary and uterus tissue. The following results were obtained:
– Histological section with hematoxylin and eosin stain of mammary
gland in bilateral ovariectomy of virgin animals revealed that decrease in the size of lobules and alveoli with less dilated and increase in adipose tissue compared with their control, while in lactating rabbits bilateral ovariectomy animal showed small lobules containing less branching alveoli with in inactive alveoli and increased in stroma. Staining sections with trichrome have revealed there is excessive amount of collagen fibers in the stroma of the mammary gland tissue in all treatment groups of lactating and virgin in comparison with their controls.
Beside that histochemistry studies of the Periodic Acid Schiffʹs (PAS) staining showed a positive reaction in histological section of mammary tissue in all groups of lactating stage, while the virgin groups showed a negative reaction to the PAS stain. On the other hand , there is a significant decrease(p<0.05) in the diameters and numbers of alveoli in all treatment groups in compared with their controls.
Histological study of the uterus sections showed many changes caused by bilateral ovariectomy , this included: decreased in thickness and folded with atrophy of uterus layers , absence of uterine glands and infiltration of inflammatory cells in compared with other groups in virgin and lactating stages. While trichrome stained sections showed an excessive amount of collagen fibers in the uterus in all treatment groups in compared with their controls.
Histological section with hematoxylin and eosin stain of pituitary gland in bilateral ovariectomy of virgin and lactating groups showed no pathological changes ,in addition , the staining with immunohistochemical stain of progesterone receptors in gonad cell showed large cells with vacuoles in their cytoplasm in bilateral ovariectimized in compared with other groups .
The estrogen and progesterone receptors expression in mammary and uterine tissue of animals treated in virgin and lactating treated groups showed weakly positive (+) stain reactions and no expression(-) of estrogen and progesterone receptors in the mammary and uterus tissue of bilateral ovariectomized virgin group. Weak expression(+) of estrogen and progesterone receptors in mammary tissue, no expression (-) of estrogen receptors and weak expression (+) of progesterone receptors in uterus tissue of lactating group. The virgin and lactating showed a strong expression (+ + +)(++) for estrogen and progesterone receptors The mammary and uterus tissue respectively in right unilateral ovariectomy , and moderate positive (++), weakly positive stain reaction (+) to estrogen receptors and progesterone receptors in the mammary and uterus in of virgin and lactating groups of left unilateral ovariectomy .
The results showed a significant increase (p<0.05) in the level of hormones (FSH, LH) in bilateral ovariectomized groups for two physiological stages( virgin , lactating ) compared to their control. In addition, there is no significant differences in prolactin hormone level in treatment groups for virgin compared with control (sham), while the prolactin hormone level significantly increased (P<0.05) in right removal of ovarian in lactating stage ,significant decrease (P<0.05) in the concentration of progesterone and estrogen hormone in bilateral ovariectomized groups for virgin and lactating stages compared with their controls .The significant decrease (P<0.05) showed in the level of LH hormone in the pituitary gland tissue.
Significant decrease (P<0.05) in the level of alkaline phophatase enzyme (ALP) and 5,- Nucleotidase enzyme (NTD) in bilateral ovariectomized group in virgin , lactating groups compared to the control in the mammary and uterus tissue.
The present study showed a significant decrease (P < 0.05) in the serum concentration of reduced glutathione (GSH) and a significant increase (P<0.05) in the serum malondiaaldehyde (MDA) concentration in ovariectomized groups for two physiological (virgin , lactating) compared with control. In conclusion , the bilateral ovariectomy caused histological , histochemical and physiological changes in the mammary ,uterus and pituitary tissue in virgin and lactating groups of female rabbits.