إِستخلاص البروانثوسيانيدينات وتنقيتها جزئيًا من بذور العنب( Vitis vinifera) ونوى التمر (dactylifera (Phoenix ودراسة بعض من فعالياتها الحيوية

2020-07-11

رسالة ماجستير

اسم الباحث : مريم هادي جبار

الكلية : كلية العلوم

الاختصاص : علوم الحياة

سنة نشر البحث : 2013

تحميل الملف : اضغط هنا لتحميل البحث

المشاهدات: 27

     تضمنت الدراسة الحالية استخلاص الفينولات الكلية والتانينات والبروانثوسيانيدينات من بذور العنب ونوى التمر بأستخدام ظروف استخلاص مختلفة كما تم تقييم الفعالية المضادة للأكسدة لهذين المستخلصين فضلا عن تنقية البروانثوسيانيدينات منهما,واظهرت النتائج مايأتي :-

1- بعد اجراء غربلة لمخلفات أثني عشر مستخلصا نباتيا اشتملت على قشور كل من اللالنكي والموز والرمان والبرتقال واوراق الاس وبذور كل من البرتقال والعنب ونوى التمر قبل الطبخ وبعده فضلا عن جلد ثمرة العنب ونخالة الحنطة وبثل الشاي الاسود, تصدر مستخلصا بذور العنب ونوى التمر جميع المستخلصات المدروسة من حيث المحتوى من البروانثوسيانيدينات ,لذا فقد تم اخضاع هذين المستخلصين لجميع مراحل الدراسة اللاحقة .

2- كانت درجتا الحرارة (25 و30) مᵒ هما الافضل في استخلاص الفينولات والتانينات والبروانثوسيانيدينات من نوى التمر وبذور العنب, على التوالي .بينما كانت مدة الاستخلاص 12ساعة وسرعة الرج 50 دورة/دقيقة هما الافضل في استخلاص البروانثوسيانيدينات من كلا المستخلصين .

3- تفوق الاسيتون على المذيبات الاخرى المستخدمة في الدراسة في استخلاصه للفينولات والتانينات والبروانثوسيانيدينات من المستخلصين قيد الدراسة . وعند تحديد التركيز الامثل من الاسيتون تبين ان التركيز %70 من هذا المذيب هو الاكفأ من حيث استخلاصه للمركبات قيد الدراسة.

4- تم دراسة الفعالية المضادة للأكسدة لمستخلصات بذور العنب ونوى التمر بأستخدام جذور ABTS وكانت اعلى فعالية مضادة للأكسدة لمستخلص بذور العنب بأستخدام الاسيتون 70%  اذ كانت قيمة IC50 عند التركيز  0.05ملغم/ مل ,اما اعلى فعالية مضادة للأكسدة لمستخلص نوى التمر فقد تم الحصول عليها بأستخدام الاسيتون 70%  والميثانول 80%  اذ كانت قيمتي IC50  عند التركيز 0.025 ملغم/ مل.

 5- تم دراسة تأثير تراكيز عدة من مستخلصي بذور العنب ونوى التمر                                      ضـد بكتـريا  Escherichia coli و Proteus ssp و Pseudomonas aeruginosa                   و  Staphylococcus aureus و Streptococcus fecalis  وStreptococcus pyogens  و كانت التراكيز المستخدمة هي (1 و5 و10 و 15و25) ملغم/مل باستعمال طريقة الانتشار في الاكار بوساطة الحفر (Agar well diffusion method) و كانت النتائج كالاتي :-

  • ان اعـلى فعـاليــة تثـبيـطـيـة لمستخلص بـذور العنـب كانـت ضـد بكتـريا Pseudomonas aeruginosa عند التركيز25 ملغم/مل وبقطر تثبيط 5±0.5 ملم .بينما بلغت التراكيز المثبطة الدنيا (MIC) 10 ملغم/ مل لكل من بكتريا  Proteus ssp                 و Staphylococcus aureus و Streptococcus pyogens في حين بلغت (5 و(15 ملغم/مل لكل من بكتريا Pseudomonas aeruginosa و Streptococcus fecalis , في حين لم يبدي المستخلص المذكوراي فعالية تثبيطية ضد بكتريا Escherichia colii ولجميع التراكيز المستخدمة من  المستخلص في هذه الدراسة.
  • اظهر مستخلص نوى التمر فعالية تثبيطية ضد بكتريا Pseudomonas aeruginosa و Staphylococcus aureusوبـقـطـري تثـبيـط بلـغا (75± 0.25و(9.25± 0.25 ملـم , عنـد التـركيــز 25 ملغم/مل , وقـد بلغت التراكيز المثبطة الدنيا (MIC) لهما           (5 و10) ملغم/مل ,على التوالي ولم تظهراي فعالية تثبيطية ضد الاجناس البكتيرية الاخرى التي اشتملت عليها الدراسة .

6- تمت تنقية البروانثوسيانيدينات من بذور العنب ونوى التمر بخطوتي تنقية اشتملت على استخدام الايثانول %95 وكروماتوغرافيا الادمصاص بأستخدام هلام Sephadex LH-20 ,اذ بلغت حصيلة البروانثوسيانيدينات في خطوتي التنقية (29.7 و24.5) و(17.48 و11.22)% لمستخلصي بذور العنب ونوى التمر, على التوالي.

7- عند فصل البروانثوسيانيدينات المنقاة بكروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة (TLC) لوحظ ظهور بقعة واحدة لمستخلصي بذور العنب ونوى التمر بقيمتي Rf مقدارهما 0.9025  و0.937 ,على التوالي, مقارنة بقيمة Rf للكاتكين القياسي والتي بلغت 0.976

Extraction and partial Purification of Proanthocyanidins from Grape (Vitis vinifera ) and Date (Phoenix dactylifera ) seeds and determination some of their Biological activities

The current study included the extraction of total phenols, tannins and proanthocyanidins from grape (Vitis vinifera) and date  (Phoenix dactylifera) seeds using different extraction conditions , and evaluation the antioxidant activity of the two extracts,as well as proanthocyanidins purification from the extracts foregoing. The resulst revealed the following:-

  • After screening of twelve plant extracts including Citrus reticulata , Musa acuminata, Punica granatum L. and Citrus sinensis peels , Myrtus communis leaves, Citrus sinensis and Vitis vinifera seeds as well as Phoenix dactylifera seeds befor cooking and after , Vitis vinifera fruit skin , Triticum aestivum bran and Camellia sinensis leaves after cooking.the results showed that grape seeds and date seeds extracts contain the highest amounts of proanthocyanidins and therefore chosed for furthure studies.
  • The temperatures (25 and 30) Cᵒ were the best degree in extraction of total phenols , tannins and proanthocyanidins from date and grape seeds, respectively. While extraction time 12 hours and shaking speed (50) rpm were the best in extraction of proanthocyanidins from both extracts.
  • Acetone was chosed as the best solvent than others which used in the study in extraction total phenols ,tannins and proanthocyanidins from grape and date seeds . Acetone 70%  was found to be the best when determined the best concentration of solvent  in extraction the studied compounds from both extracts.
  • The ABTS assay was used for determining antioxidant activity of grape and date seeds extracts. Results indicated that the highest antioxidant of grape seeds was shown by acetone 70% extract .The acetone 70% and methanol 80% date seeds extracts possessed hieghest antioxidant activity than other extracts.
  • Several concentrations [(1,5,10,15,25) mg/ml] of grape seeds and date seeds extracts were tested for antibacterial activity(by agar well diffusion method) against Escherichia coli , Proteus ssp , Pseudomonas aeruginosa , Staphylococcus aureus ,  Streptococcus fecalis and Streptococcus pyogens bacteria,the results revealed the following:-

a-The highest antibacterial activity of grape seeds extract was against Pseudomonas aeruginosa ,and the minimum inhibitory concentration (MIC) was 10 mg/ml against Proteus ssp, Staphylococcus aureus and Streptococcus pyogens, and (5 and 10) mg/ml against Pseudomonas aeruginosa and Streptococcus fecalis ,respectively. While there was no effect towards Escherichia coli in all extract concentration used in this study.

b- date seeds extract showed antibacterial activity against Pseudomonas aeruginosa and  Staphylococcus aureus only, with minimum inhibitory concentration (MIC) of (5 and 10) mg/ml , respectively .

  • The proanthocyanidins were purified from grape and date seeds extracts .The purification procedure included extraction with ethanol 95% for both extracts and then using adsorption chromatography with sephadex LH – 20 gel , where the ratio of proanthocyanidins reached (29.7 and 24.5) and (17.48 and11.22)% for the two purification steps of grape seeds and date seeds extracts , respectively .
  • The purified proanthocyanidins from grape seeds and date seeds extracts showed a single spot when separated with thin layer chromatography with Rf values of (0.9025 and 0.937) in comparison with Rf value for standard catechine which reached to (0.976).