الفعالية السمية الخلوية لجسيمات الفضة النانوية (AgNo3) والمستخلص الكحولي للعكبر على خط خلايا سرطان القولون البشري (SW480)

رسالة ماجستير

اسم الباحث : كوثر نعمة نجم عبد السعدي

اسم المشرف : أ.د. ياسمين خضير الغانمي

الكلمات المفتاحية :

الكلية : كلية التربية للعلوم الصرفة

الاختصاص : علوم الحياة/علم الحيوان

سنة نشر البحث : 2022

تحميل الملف : اضغط هنا لتحميل البحث

اجريت هذه الدراسة لإيجاد العلاقة بين منتج الايض الثانوي العكبر وأخطر الأمراض التي تصيب الإنسان وهو السرطان باستخدام خط خلايا سرطان القولون البشري (SW480). حيث هدفت الدراسة الى اختبار امكانية التأثير السمي للعكبر العراقي ضد خط خلايا سرطان القولون البشري. أجريت اختبارات الجسيمات النانوية واختبار الـ DNA في مختبرات دائرة البيئة وتكنولوجيا المياه التابعة لوزارة العلوم والتكنولوجيا، بينما أجريت الزراعة النسيجية واختبار السمية الخلوية وعد الخلايا في مركز الزراعة النسيجية Cell culture techniquesفي كلية الطب/ جامعة بابل امتدت من شهر ايلول (2021) حتى شهر كانون الثاني (2022).
تم الكشف الكيميائي للمركبات الموجودة في العكبر العراقي الخام بمحافظة كربلاء بأختبار (HPLC) High Performance Liquid Chromatography اذ وجد ان العكبر الخام يحتوي على مركبات الايض الثانوي مرتبة من اعلى نسبة الى الاقل (الفينول، القلويد، الكلايكوسيد، التانين، الفلافون، الصابونين).
تم تحضير المستخلص الكحولي والنانوي للعكبر.
تم قياس الامتصاص الذري الطيفي لدقائق الفضة النانوية المحضرة حسب طريقة (AAS) Atomic Absorption Spectroscopy كانت التراكيز لمستخلص العكبر الايثانولي (1%،3%،5%،7%) وقراءة الجهاز (200، 350، 500، 650) جزء في المليون على التوالي لجسيمات الفضة النانوية لمستخلص العكبر الكحولي.
تم التحليل الطيفي بالأشعة تحت الحمراء (FT-IR) Fourier transform infrared spectroscopy للمستخلص الايثانولي وقد ظهرت نطاقات امتصاص عند المدى (1634،667،588،1958،2028) سم-1. اما المستخلص النانوي للعكبر ظهرت نطاقات امتصاص عند المدى (588،667،1031،1384،1634،1958،2028،2925) سم-1، تشير النطاقات الاهتزازية الممتدة الى المركبات المسؤولة عن حدوثها وابرزها مجاميع الفلافون وبالتالي يمكن اعتبارها المسؤولة عن التغطية الفعالة وتثبيت AgNPs .
حيث شخصت جسيمات العكبر النانوية بمجهر القوة الذرية (AFM) Atomic Force Microscope بأجسام كروية الشكل بمتوسط حجم (70) نانومتير.
تم التحري عن التأثير السمي الخلوي والسمي الجيني للمستخلص الكحولي للعكبر ضد خط خلايا سرطان القولون البشري لفترة (24) ساعة من التعريض عند مستوى معنوية (p<0.05) باستعمال ستة تراكيز متسلسلة للمستخلص الايثانولي هي (31.25، 62.5، 125، 250 ، 500، 1000) g/mlµ فكانت نسب التثبيط عالية مع نقصان كبير في عدد الخلايا السرطانية ونسب عالية لتحطم DNA باستعمال اختبار المذنب Comet assay، ووصل اعلى تثبيط عند تركيز 500، 1000 g/mlµ، ازدادت السمية الخلوية والجينية بزيادة التركيز.
تم التحري عن التأثير السمي الخلوي والسمي الجيني للمستخلص النانوي ضد خط خلايا سرطان القولون البشري لمدة زمنية من التعريض (24) ساعة عند مستوى معنوية (p<0.05) باستعمال اربعة تراكيز متسلسلة للمستخلص النانوي هي (1% ،3% ،5% ،7%) g/mlµ اظهرت النتائج ارتفاع نسب تثبيط الخلايا السرطانية مع نقصان كبير جداً في عدد الخلايا السرطانية ونسب تحطم DNA عالية جداً، بحيث اعلى نسبة تثبيط عند تركيز (5% ،7%) g/mlµ، وكان المستخلص النانوي بتركيز (1%) اعلى تأثيراً من تركيز (1000) g/mlµ للمستخلص الكحولي، ازدادت السمية الخلوية والجينية بزيادة التركيز.

Cytotoxic activity of silver nanoparticles (AgNo3) and alcoholic extract of propolis on human colon cancer cell line (SW480)

Summary
This study was conducted to find the relationship between the by-product of propolis metabolism and the most dangerous human disease, which is cancer, using the human colon cancer cell line (SW480). The study aimed to test the possibility of the toxic effect of Iraqi propolis against the human colon cancer cell line. Nanoparticle tests and DNA testing were conducted in the laboratories of the Department of Environment and Water Technology of the Ministry of Science and Technology, while tissue culture, cytotoxicity testing and cell counting were conducted in Cell culture techniques at the College of Medicine/University of Babylon from September (2021) to January (2022).
The chemical detection of the compounds found in Iraqi raw propolis in Karbala governorate was carried out by (HPLC) High Performance Liquid Chromatography test, as it was found that raw propolis contains secondary metabolites arranged from highest to lowest ratio (phenol, alkaloid, glycoside, tannin, flavone, saponin).
The alcoholic and nano-extract of propolis was prepared.
The atomic absorption spectroscopically of silver nanoparticles prepared according to Atomic Absorption Spectros (AAS) method was measured. The concentrations of ethanolic propolis extract were (1%, 3%, 5%, 7%) and the device read (200, 350, 500, 650) ppm on Sequence of silver nanoparticles of alcoholic propolis extract.
Fourier transform infrared spectroscopy (FT-IR) of the ethanolic extract was performed, and absorption bands appeared at the range (588, 667, 1634, 1958, 2028) cm-1. As for the nano-extract of propolis, absorption bands appeared at the range (588, 667, 1031, 1384 ,1634 ,1958 ,2028 ,2925) cm-1. The extended vibrational bands refer to the compounds responsible for its occurrence, most notably the flavonoid groups, and therefore can be considered responsible for effective coverage and stabilization AgNPs.
Where the propolis nanoparticles were diagnosed by Atomic Force Microscope (AFM) with spherical objects with an average size of (70) nanometers.
The cytotoxic and genotoxic effect of alcoholic extract of propolis against human colon cancer cell line was investigated for a period of (24) hours of exposure at a significant level (p<0.05) using six sequential concentrations of the ethanolic extract (31.25, 62.5, 125, 250, 500, 1000) µg/ml, the inhibition rates were high with a significant decrease in the number of cancer cells and high rates of DNA breakage using Comet assay test, The highest inhibition was reached at a concentration of 500 and 1000 µg/ml, the cytotoxicity and genetics increased with increasing concentration.
The cytotoxic and genotoxic effect of the nano-extract against human colon cancer cell line was investigated for a period of exposure (24) hours at a significant level (p<0.05) using four sequential concentrations of the nano-extract (1%, 3%, 5%, 7%). µg/ml The results showed a high percentage of inhibition of cancer cells with a very large decrease in the number of cancer cells and very high rates of DNA breakage, so that the highest percentage of inhibition was at a concentration of (5%, 7%) µg/ml, and the nano extract was at a concentration of (1%). More effective than the concentration of (1000) µg/ml of the alcoholic extract, the cytotoxicity and genetics increased with increasing concentration.