الكشف الجزيئي لبعض عوامل الضراوة في بكتريا Staphylococcus aureus المقاومة للمثيسيلين المعزولة من مصادر سريرية مختلفة

رسالة ماجستير

اسم الباحث : فاطمة سالم عبيد الجاسمي

اسم المشرف : أ.د. علي عبد الكاظم جاسم الغانمي

الكلمات المفتاحية :

الكلية : كلية العلوم

الاختصاص : علوم الحياة

سنة نشر البحث : 2023

تحميل الملف : اضغط هنا لتحميل البحث

تضمنت هذه الدراسة الحصول على 31عزلة من المكورات العنقودية الذهبية من المرضى المراجعين لمستشفى النسائية والتوليد التعليمي ، مدينة الامام الحسين (ع) الطبية ،مختبر الصحة العامة فضلا عن العيادات الخارجية ومن مصادر سريرية مختلفة تمثلت بالحروق ، الجروح، الدم ،الادرار والجلد .وقد خضعت هذه العزلات الى بعض الفحوصات المجهرية والكيموحيوية والجزيئية للتأكد من تصنيفها من حيث الجنس والنوع ، كما خضعت تلك العزلات ايضا لاختبار تحديد البكتريا المقاومة للمثيسلين عن تلك الحساسة منها . اعقب ذلك التحري عن قابلية العزلات المقاومة للمثيسلين على انتاج بعض عوامل الضراوة المتمثلة في الغشاء الحيوي والبروتييز والانزيم الحال للدم فضلا عن التحري عن وجود بعض جينات الضراوة والمقاومة للمضادات الحيوية تضمنت جين mecA و hlb و lukED و tetK. وقد أظهرت النتائج ماياتي :
 اثبتت الاختبارات الشكلية والكيموحيوية إن العزلات المتحصل عليها كانت عائدة إلى جنس المكورات العنقودية بواقع 31 عزلة من أصل 150 عينة وبنسبة عزل 20.6 % تضمنت عشر عزلات من الحروق وثماني عزلات من الجروح وثلاث من الدم وخمس عزلات من الادرار والجلد بنسب ( 32.25 , 25.80 , 9.67 , 16.12, 16.12)% ، علي التوالي .
 بلغ عدد العزلات البكتيرية المقاومة للمثيسلين (24) بنسبة 77.41 %
 من خلال اختبار حساسية عزلات بكتريا المكورات العنقودية الذهبية المقاومة للمثيسلين للمضادات الحيوية تبين إن كل العزلات مقاومة لمضادات Benzyl Penicillins وAmoxicillin وPiperacillin وAmpicillin – Sulbactam وAmoxicillin Clavulanic Acid وCarbenicillin و Amoxicillin ) بنسبة 100% ، وذات النسبة لمجموعة المضادات العائدة لعائلة Cephalosporins)) المتمثلة في في Cefadroxil و Cephalexin من الجيل ألاول وCefuroxime من الجيل الثاني و Cefixime و Cefpodoxime و Ceftriaxoneو Cefotaximeو Ceftizoxime وCeftazidime و Cefoperazone من الجيل الثالث و Cefepime وCefpirome من الجيل الرابع . واظهرت هذه البكتريا حساسية بنسبة 100% لمضاد (Vancomycin و Linezolid).
 أظهرت نتائج الاختبارات الجزيئية وجود جينات (femA و mecA و hlb و tetK) بنسبة 100% في العزلات الاربع والعشرين المختبرة ، بينما كان جين lukED موجودا بنسبة 58.3%.
 أظهرت الدراسات إن العزلات جميعها لها القابلية على انتاج الغشاء الحيوي باستخدام الطريقة النوعية ،وتوزعت قابليتها بين المنتجة القوية بنسبة 29.16% والمتوسطة الانتاج بنسبة 50% والضعيفة بنسبة 20.8%، بينما توزعت العزلات عند استخدام الطريقة الكمية المتمثلة بطريقة الصفيحة بواقع 25% منها قوية الانتاج و 66.6% منها متوسطة و 8.3% منها ضعيفة الانتاج .
 اتضح وجود علاقة بين قوة الغشاء الحيوي ومقاومة البكتريا للمضادات الحيوية .
 أظهرت النتائج إن العزلات التي لها القابلية على انتاج انزيم البروتييز هي 20 عزلة وبنسبة 83.3% باستعمال الكازائين كماده اساس وأبرت العزلة S9 اعلى انتاج بفعالية انزيمية 13.9 وحدة \ملليتر.
أظهرت العزلات المتمثلة في S6 ,S9,S22)) فعالية منخفضة لانزيم الهيمولايسين .

Molecular detection of some virulence factor in methicillin resistant Staphylococcus aureus isolated from different clinical sources

This study included obtaining 31 isolates of Staphylococcus aureus from patients attending the Obstetrics and Gynecology Teaching Hospital, Imam Hussein Medical City, and the Public Health Laboratory, as well as outpatient clinics, and from various clinical sources represented by burns, wounds, blood, urine, and skin. These isolates were subjected to some microscopic, biochemical and molecular examinations to ensure their classification in terms of genus and species. These isolates were also subjected to a test to identify methicillin-resistant bacteria from those sensitive to them. This was followed by an investigation of the ability of methicillin-resistant isolates to produce some virulence factors represented in the biofilm, protease and hemolytic enzyme, as well as the investigation of the presence of some virulence and antibiotic resistance genes, including mecA, hlb, lukED and tetK. The results showed the following:
 The morphological and biochemical tests proved that the obtained isolates belonged to the genus Staphylococcus, with 31 isolates out of 150 samples, with an isolation rate of 20.6%, which included ten isolates from burns, eight isolates from wounds, three from blood, and five isolates from urine and skin, with percentages (32.25, 25.80, 9.67, 16.12, 16.12)%, respectively.
 The number of bacterial isolates resistant to methicillin was 24, with a rate of 77.41%.

 By testing the sensitivity of methicillin-resistant Staphylococcus aureus isolates to antibiotics, it was found that all isolates are resistant to (Benzyl Penicillins, Amoxicillin, Piperacillin, Ampicillin – Sulbactam, Amoxicillin Clavulanic Acid, Carbenicillin, and Amoxicillin) by 100%, and the same percentage for the group of antibiotics belonging to the Cephalosporins family represented by in Cefadroxil, Cephalexin of the first generation, Cefuroxime of the second generation, Cefixime, Cefpodoxime, Ceftriaxone, Cefotaxime, Ceftizoxime, Ceftazidime, Cefoperazone of the third generation, Cefepime, and Cefpirome of the fourth generation. These bacteria showed 100% sensitivity to (Vancomycin and Linezolid).
 The results of the molecular tests showed the presence of genes (femA, mecA, hlb and tetK) by 100% in the twenty-four tested isolates, while the lukED gene was present by 58.3%.
 Studies have shown that all isolates have the ability to produce biofilm using the qualitative method, and their ability was distributed between the strong producers by 29.16%, the medium producers by 50%, and the weak by 20.8%, while the isolates were distributed when using the quantitative method represented by the plate method, with 25% of them being highly productive and 66.6% of them are medium and 8.3% of them are of poor production.
 It was found that there is a relationship between the strength of the biofilm and the resistance of bacteria to antibiotics.

 The results showed that the isolates that have the ability to produce the protease enzyme are 20 isolate, with a rate of 83.3%, using casein as a base material, and the isolate S9 produced the highest production with an enzyme activity of 13.9 units / ml.
 The isolates (S6, S9, and S22) showed low activity