دراسة الخصائص المظهرية والجزيئية للفطر Sclerotinia sclerotiorum(Lib.)De Bary في محافظة بابل وظروف إنتاجه للأجسام الثمرية

رسالة ماجستير

اسم الباحث : نادية نايف حسين محمد المسعـودي

الكلية : كلية التربية للعلوم الصرفة

الاختصاص : علوم الحياة

سنة نشر البحث : 2011 2015

تحميل الملف : اضغط هنا لتحميل البحث

تضمنت الدراسة عزل وتشخيص الفطر Sclerotinia sclerotiorum (Lib.) de Bary بالإعتماد على الصفات المظهرية والمجهرية ، وجزيئياً بتقانة (PCR) Polymerase chain reaction، بإستخدام البادئ 18S rRNA gene  وتحديد الجين oxaloacetate acetylhydrolase المسؤول عن إنتاج حامض الأوكزاليك  Oxalic acid geneفي الفطر   .

        تم اكثار الفطر باستخدام وسط  حبوب الحنطة   Wheat grain medium للحصول على اكبر كمية ممكنة من الاجسام الحجرية لإجراء التجارب اللاحقة، وتم دراسة تأثير بعض الظروف البيئية من درجات الحرارة ، والإضاءة  والظلام في إنتاج  التراكيب التكاثرية الجنسية Apothecium للفطر Sclerotinia sclerotiorum .

         تم دراسة أبعاد الأجسام الحجرية ومعامل الإرتباط  بين طولها ، وعرضها ، وانتاجيتها للأجسام الثمرية Apothecium، والأكياس البوغية Ascus، والأبواغ الكيسية Ascospores ، فضلاً عن نمط توزيع الأجسام الحجريةPattern of Sclerotia Distribution  على وسط آكار سكروز مستخلص البطاطا .PSA

         في دراسة تأثير ملح كلوريد الصوديوم NaCl  بتركيز 100ملي مكافئ / لتر في انبات الابواغ ، ونموها الخضري ، وانتاجها للأجسام الحجرية على وسط PSA .

         كما أثرت العوامل البيئية المتمثلة بدرجات الحرارة 10،15،20،25  0م والإضاءة أو الظلام . في إنتاج السويقات  Stipesوالأجسام الثمرية Apothecium من الجسم الحجري، فكانت درجات الحرارة 10 و15 و20 0م مناسبة لإنتاج الأجسام الثمرية شرط توفر الإضاءة وإلا فإن الأجسام الثمرية لم يكتمل نموها وتبقى بشكل سويق stipe يستطيل في ظروف الظلام ،اما درجة الحرارة 25  0م لم تنتج اجسام ثمرية حتى بوجود الاضاءة ، ولم يحصل نمو للسويقات عند هذه الدرجة .

         وجد ان هناك ارتباط معنوي بين عرض الجسم الحجري وعدد السويقات وبين مساحة الجسم الحجري و عدد السويقات  وكذلك بين مساحة الجسم الحجري و قطر الأجسام الثمرية ، ولم يكن هنالك ارتباط بين طول او عرض الجسم الحجري ، وطول وعرض الاكياس او طول وعرض الابواغ الكيسية، مما يؤكد اعتمادها في التصنيف المظهري والمجهري للفطر، حيث بلغت أبعاد الجسم الحجري 24- 6  ملم طولاً و 12-1ملم عرضاً، ومعدل عدد السويقات 26-3 وطولها15-6  وعدد الأجسام الثمرية 26-2 وقطرها 6-2 ملم، وطول الكيس بلغ 31-15 وعرضه13-2 مايكرون، وطول البوغ7-3  وعرضه 5-2 مايكرون.

        اختلف عدد الاجسام الحجرية المنتجة من بوغ مفرد وتفوقت في عددها عن حالة وجود اكثر من بوغ في الطبق ففي حالة بوغ واحد أعطى معدل للأجسام الحجرية 7.1 وفي حالة بوغين وثلاثة وأربعة وخمسة  4.4 ،3.9 ، 5.7 ، 5.4 على التوالي ، كذلك ارتبطت مع نمط توزيع تلك الاجسام في الطبق. وسجلت ظهور حالة عدم التوافق في حالة زراعة اكثر من بوغ في الطبق ، وذلك عند تكون منطقة فاصلة متمثلة بنمو ابيض كثيف من الغزل الفطري يعلو سطح الوسط .

        اظهرت النتائج ان  هنالك تذبذب في النمو الخضري للفطر بوجود تراكيز ملحية مختلفة من ملح كلوريد الصوديوم NaCl وخاصة في الساعات الاولى من الحضن ، وتبين الانخفاض في معدل النمو في التركيز الذي يمثل100 ملي مكافئ /لتر وهو تركيز العتبة ، في حين اعطى تركيز الربع وتركيز  الضعف معدل نمو اعلى ، وعدّ هذا نوع من المقاومة ، كما ان وجود التراكيز الملحية المختلفة أدت إلى إنتاج أعداد أقل من الأجسام الحجرية مما في الماء المقطر المعقم واختلفت معنويا ،ففي الماء المقطر بلغ معدل عدد الأجسام الحجرية 9.35 وأعطت التراكيز0.145 ،0.580  ،1.160 أجسام حجرية بلغت 3.45،3.80،2.50 على التوالي

Morphological and Molecular Study of Sclerotinia sclerotiorum (Lib.)De Bary in Babylon Governorate and conditions of its Apothecium Production

The study included isolation and diagnosing the fungi Sclerotinia sclerotiorum (Lib.) de Bary based on the morphological ,  microscopic and molecular properties using PCR techniques using the Primer 18S rRNA and determination  the gene oxalate acetylhydrolase which is responsible on the production of oxalic acid gene in the fungi .

 The fungi was propagated using wheat grain medium to obtain a maximum number sclerotia of the following experiments. Some environmental conditions were studied i.e. temperature ,light, darkness in producing apothecium.

Dimensions of sclerotia were studied and the correlation coefficient between the length  and the width and their production  of Sclerotia, Ascus and Ascospores, in addition to the pattern of sclerotia distribution grown on PSA.

 was calculated respect of salinity at 100 meq./l as NaCl effect on the germination, vegetative growth and their production of sclerotia grown on PSA medium was studied .

Environmental factors expressed by temperature at 10,15,20  and 25 0C  and light and darkness affected the stipes ,and apothecium of the sclerotia .The temperatures 10,15 and 20 0C were suitable for apothecium production in the presence of light otherwise there is no complete growth of apothecium in the absence of light which is remaining as stipes ,elongating in the dark conditions .Whereas at temperature of 25 0C no apothecium in the presence of light and no stipes growth as well was noticed .

There was a significant correlation between the width of sclerotia and the number of stipes, and between the area of sclerotia and the number of  stipes, between the area of sclerotia and the diameter of the sclerotia. There are no correlation between length and width of sclerotia, length and width of Ascus or length of ascospore, indicating their importance in the morphology and microscopic taxonomy .The diameter of Sclerotinia was 6-24m/length and 1-12m in width, the average number of stipes were 3-26 and 3-5m in length, and the number of apothecium 3-26, and 2-6 m in diameter, the length of Ascus was 15-31 m and 2-13m, 3-7m and 2-5m in width.

The number of sclerotia produced from single spore was different and produced more than 7.1 sclerotia .In the case of more than one spore in the petri dish i.e. two, three , four and five single spores gave 4.4 ,3.9 ,5.7 ,5.4 sclerotia respectively .the criteria correlated with distrbution pattern of the sclerotia in the petri dish recording occurrence of in compatibility in the case of ring more than one spore .

The single spore obtained was used in the study of vegetative growth in the presence of single and many spores in the petri dish, and also to study the pattern distribution of sclerotia grown on PSA.

The effect of NaCl at 100 meq.l-1 quarter and double of this concentration as well as the sterilized distilled water (as control treatment) on the spores germination  ,vegetative growth and its production of  sclerotia on PSA was also investigated

Results also revealed a fluctuation in the vegetative growth of the fungi in presence of NaCl especially  at the first hours from incubation .The reduction in the growth rate was obvious at 100 meq.l-1 NaCl gave higher growth considering this case as a kind of the resistance. In the presence of salinity at different levels produced less number of Sclerotinia compared with sterilized distilled water. Different concentrations of salinity  caused a less number of sclerotia compared with sterilized  distilled water ,and was significantly different  in the distilled water where the mean  sclerotia number was 9.35 .The salinity concentrations at  0.145 , 0.580 and 1.160 gave  3.45 , 3.80 and 2.50 sclerotia respectively