دراسة بعض العوامل في انتاج الكواكيوليز Coagulase من المكورات العنقودية Staphylococci المعزولة محليا

رسالة ماجستير

اسم الباحث : براك ثامر شبيب السالمي

الكلية : كلية العلوم

الاختصاص : علوم الحياة

سنة نشر البحث : 2014

تحميل الملف : اضغط هنا لتحميل البحث

تضمنت الدراسة عزل وتشخيص جراثيم المكورات العنقودية الموجبة لانزيم مخثر البلازما Coagulase Positive Staphylococci)) من عينات سريريـــة بلغت (102) عينة من مستشفيات مدينة كربلاء المقدسة (مستشفى الحسين(ع) العام ومستشفى كربلاء للأطفال ) وشملت المسحات الأنفية Nasal swabs ، المسحات الأذنية Ear swabs ، المسحات الجلدية Skin swabs ،مسحات الحروق Burn swabs ، مسحات الجروح Wound swabs ، مسحـــات صــالات العمليــــات Operation swabs وعينـــات الإدرار Urine sample كذلك العينات الغذائية والتي أعتمد جمعها من الباعة المتجولين المفتقدين لعنصر النظافة والتـــي بلغت (35) عينـــــة وشملت عينات الأجبان Cheese sample ، عينات الألبــــان Dairy sample ، عينات اللحــــومMeat sample  وعينات البوظــــة Ice cream sample  للفترة بين (15 نيسان- 15 تموز2014).

شخصت العزلات وفق الإختبارات المظهرية والبايوكيميائية  وبعد تشخيص المستعمرات النامية وجد أن البكتريا الموجبة لملون غرام شكلت نسبة (%69.98) للعينات السريرية و(%57.89) للعينات الغذائية من مجموع العزلات التي أعطت نمو على الأوساط الزرعية وشكلت بكتريا المكورات العنقودية Staphylococci نسبة (%45.09) و(%45.45) للعينات السريرية والغذائية على التوالي من مجموع العزلات الموجبة لملون غرام ، و شكلت المكورات العنقودية الموجبة لانزيم مخثر البلازما  (Coagulase Positive Staphylococci) نسبة (%39.13) من مجموع بكتريا المكورات العنقودية  Staphylococciالمستحصل عليها أثناء العزل والتشخيص للعينات السريرية  كما ظهرت نسبة (%60.86) للمكورات العنقودية الموجبة لانزيم مخثر البلازما (Coagulase Positive Staphylococci) من مجموع بكتريا المكورات العنقودية  Staphylococci في العينات الغذائية وتم تشخيص نوعين من المكورات العنقودية الموجبة لانزيم مخثر البلازما CPS)) وهماS. aureus  وS. hyicus بالإعتماد على إختبار انزيم مخثر البلازما بنوعيه Slide and Tube Coagulase Test وكذلك بالإعتماد على الفحوصات البايوكيميائية الأخرى ونظام أشرطة الابي Api staph 0

تم إختبار حساسية المكورات العنقودية الموجبة لانزيم مخثر البلازما (CPS) للمضادات الحيوية لتحديد المضاد الأكثر فعالية ضد هذه البكتريا كذلك تم تحديد المضادات التي تقاومها البكتريا ووجد أن المضاد الأكثر فعالية على بكتريا S.aureus هو مضاد Azithromycin أما بكتريا S.hyicus  فكان مضاد Erythromycin هو الأكثر فعالية تجاه هذه البكتريا كما أبدت بكتريا S.aureus  مقاومةً واضحةً لمضادErythromycin  وكذلك مضاد Ciprofloxacin أما بكتريا S.hyicus فأبدت مقاومة واضحة لمضاد Streptomycin وكذلك لمضاد Gentamycin0

تم دراسة الظروف المختلفة لإنتاج انزيم مخثر البلازما (Coagulase) لكلا النوعين المدروسين ولوحظ أن هنالك تشابهاً كبيراً في تلك الظروف ما عدا بعض الإختلافات0أشارت النتائج أن وسط  Chemical defined medium  أدى إلـــى زيادة في إنتاج الانزيم في كلا النوعين قيد الدراسة ولوحظ أن درجة الحرارة الملائمة في إنتاج الانزيم هي نفسها لكلا النوعين وهي درجة حرارة (37) م  ولوحظ أن الأس الهيدروجيني الذي أدى إلى زيادة إنتاج الانزيم كان متماثلاً لكلا النوعين وهو (7.5) ، توافقا كلا النوعين في إنتاجيتهما للأنزيم بفترة الحضن (24hrs.) وتوافقت النتائج من حيث الإنتاج الجيد للأنزيم في كلا النوعين عند استخدام حاضنة هزازة بسرعة (100) هزة.

أما الإختلاف الذي لوحظ في إنتاجية الانزيم هو أن بكتريا S. aureus تقوم بإنتاج كميات عالية من الانزيم باستخدام بلازما الارانب والإنسان كما لوحظ أن بلازما الأرانب والخراف هما المناسبين في إنتاج الانزيم في بكتريا S. hyicus كما لوحظ ان تركيز البلازما 5/1 هو الملائم في انتاج الانزيم لبكتريا  S. aureus  خلافاً لما لوحظ أن تركيز 8/1 من البلازما هو الملائم في إنتاج الانزيم في بكتريا S. hyicus أما بالنسبة لإستخدام أملاح الأيونات فلوحظ أن استخدام أملاح أيونات المغنيسيوم MgCl2 يؤدي إلى إنتاج عالي للأنزيم في بكتريا S. aureus أما بالنسبة لبكتريا S. hyicus فلوحظ أن أملاح أيونات البوتاسيوم  KClأدت الى زيادة الإنتاج ولوحظ أيضاً أن أيونات أملاح الصوديوم لها تأثير سلبي في قلة الإنتاج لكلا النوعين .

 

 

 

Study of Some Factors Affecting Coagulase Production by Local Isolates of Staphylococci

The study include isolate and diagnosis the Coagulase Positive Staphylococci from clinical samples reached (102) sample of Hospitals Holy City of Kerbala (General Al Hussein Hospital and Kerbala Children Hospital) included Nasal swabs , Ear swabs , skin swabs , Burn swabs , Wound swabs ,Operation swabs and Urine sample ,as well as food samples and adopted collected from hawkers have not component cleanliness , which amounted to (35) sample ,which included food samples such as cheese , Dairy sample , samples of meat and ice cream sample for the period between (15 April  and 30 Jule  , 2014) .

Diagnosis of  isolates was done  according to tests of morphological and biochemical and after a diagnosis of colonies growth found that the bacteria positive for gram-stain formed ratio (٪69.98) for clinical samples and (٪57.89) for samples of food from the total isolates that gave the growth on culture media. And formed Staphylococci bacteria percentage (٪45.09) and (٪45.45) of clinical and food samples respectively, of the total isolates were positive for gram-stain. It also formed a Coagulase Positive Staphylococci ratio (٪39.13) of the total bacteria staphylococci acquired during isolation and diagnosis of clinical samples emerged as the percentage (٪60.0) of Coagulase positive staphylococci of total bacteria staphylococci in food samples. Also been diagnosed tow species of CPS (S. aureus and S. hyicus ) depending on the both types of Slide and Tube Coagulase Test as well as relying on other biochemical tests and Api staph system .

Also been tested the sensitivity of CPS toward antibiotic to determine the most effective antibiotic toward these bacteria and found that the Azithromycin antibiotic was the most effective antibiotic toward S.aureus in contrast of S.hyicus that found the Erythromycin antibiotic was the most effective antibiotic toward it. As shown bacteria S.aureus resistant clear to Erythromycin antibiotic as well as Ciprofloxacin antibiotic , as for the S.hyicus bacteria show obvious resistance to streptomycin antibiotic as well as for Gentamycin antibiotic. Been studying the different condition for the production of Coagulase enzyme for both species , it was noted that is a great similarity in those circumstances except for some difference , the results indicate that the chemical defined medium led to an increase in the production of the enzyme in both types under study , it was noted that the degree of appropriate temperature in the production of the enzyme is the same for both types, a temperature (37) C° it was noted that the pH, which led to increased production of the enzyme was identical for both types, a (7.5) and agreed both species in the  good production of the enzyme in incubation time (24 hrs.) , it also coincided result in good production of the enzyme in both species when using shaking incubator (100 rpm).

The difference observed in the productivity of the enzyme was that the bacteria S. aureus produce high amounts of the enzyme using rabbits and humans plasma and was also examined  that rabbits and sheep plasma were suitable in the production of the enzyme in bacteria S. hyicus It was also observed that the plasma concentration of 1/5 is appropriate in enzyme production of bacteria S. aureus, contrary to what was observed that 1/8 of the plasma concentration is appropriate in the production of the enzyme in bacteria S. hyicus As for the use of ion salts was observed that the use of magnesium ions salts (MgCl2) leads to high production of the enzyme in bacteria S. aureus As for the bacteria S. hyicus was showed  that potassium ions (KCl) salts having high production also observed that sodium salts ions have a negative impact on the lack of production of both types.