دراسة جنينية مناعية لتأثير عقار الايبوبروفين المحمل على المركب النانوي الأخضر في إناث الجرذان البيض الحوامل

رسالة ماجستير

اسم الباحث : رجوان حسن شارد الكروي

اسم المشرف : أ.م.د.علاء حسين مهدي الصافي : أ.م.د.قيصر عبدالسجاد السلمان

الكلمات المفتاحية :

الكلية : كلية التربية للعلوم الصرفة

الاختصاص : علوم الحياة/علم الحيوان

سنة نشر البحث : 2023

تحميل الملف : اضغط هنا لتحميل البحث

هدفت الدراسة الحالية إلى تحضير وتشخيص المركب النانوي الأخضر من أوراق نبات المورينجا أوليفيرا Moringa oleifera وتحسين فعاليته البيولوجية وتقييم فعاليته الحيوية قبل وبعد تحميل عقار الايبوبروفين في اناث الجرذان الحوامل وانغراس اجنتها .
أجريت هذه الدراسة في مختبرات كلية التربية للعلوم الصرفة / جامعة كربلاء ، تمت خلال المدة من تشرين الأول / 2022 ولغاية شباط / 2023 ، وقد تم استعمال 70 من الجرذان البيض منها عشرة ذكور لحدوث الحمل فقط و60 من أناث الجرذان وقسمت إلى ست مجاميع شملت كل مجموعة عشرة من الأناث الحوامل ، كانت المجموعة الأولى (G1) مجموعة السيطرة جرعت بالمحلول الملحي الفسيولوجي اما المجموعة الثانية (G2)فقد جرعت فمويا بعقار الايبوبروفين بتركيز 166 ملغم/ كغم من وزن الجسم المجموعة الثالثة (G3) جرعت فمويا بالمستخلص المائي لأوراق أوراق نبات المورينجا اوليفيرا بتركيز 300 ملغرام/ كيلوغرام من وزن الجسم ، المجموعة الرابعة (G4) جرعت فمويا بالمركب النانوي بتركيز 150ملغرام/كيلوغرام من وزن الجسم ، المجموعة الخامسة (G5) جرعت فمويا بالمستخلص المائي لأوراق أوراق نبات المورينجا اوليفيرا المحمل بعقار الايبوبروفين بتركيز (300+166) ملغرام/كيلوغرام من وزن الجسم ، المجموعة السادسة (G6) جرعت فمويا بالمركب النانوي محمل بعقار الايبوبروفين بتركيز (150+166) ملغرام/كيلوغرام من وزن الجسم . وقد جرعت الحيوانات في المجاميع المعاملة جميعها مرتين باليوم منذ بداية الحمل إلى أن تم التضحية بها في نهاية التجربة .
تم تقسيم كل مجموعة إلى مجموعتين ثانويتين ، كل منها ضمت خمس أناث حوامل وفي اليوم السابع من الحمل تم التضحية بالمجموعة الثانوية الأولى لدراسة مواقع الانغراس ، اما المجموعة الثانوية الثانية تم التضحية بها في اليوم 18 من الحمل لدراسة تأثير المعاملات على الأجنة ، كما تم سحب الدم من الأناث الحوامل في يوم التضحية ولجميع المعاملات وخلال مرحلتي الحمل (18،7) يوم على التوالي ، علما ان مدة الحمل في الجرذان (21) يوم .
في الدراسة الحالية أظهرت نتائج المقاطع الملونة بملون الهيموتوكسلين – الايوسين من مواقع الانغراس لاناث الجرذان مجموعة السيطرة والمجاميع المعاملة لليوم السابع من الحمل نتائج مشابهة لما موجود في الحمل الطبيعي بانغراس وتشكيل النسيج الساقط في بطانة الرحم أولاً في المنطقة المضادة للمساريق وهو ما يعد علامة على نجاح الانغراس في الوقت الذي يكون فيه النسيج الساقط في أعلى مستوياته من التطور والتقدم .
أظهرت نتائج الدراسة الحالية أن معدل عدد الأجنة 8-9 في جميع المجاميع ماعدا (G4,G6) كان فيها انخفاض بعدد الاجنة بينما كان هناك ارتفاع معنوي (P<0.05) في اعداد الاجنة المدمصة لدى الجرذان الحوامل في المجموعتين (G5,G6) .
ظهور عدد من التشوهات المظهرية لدى اجنة الجرذان بعمر 18 يوم من الحمل في المجاميع (G4,G5,G6) والتي تمثلت بقصر الأطراف الامامية وذراع منحفض وتورم في الجزء العلوي من الراس وانحناء الراس نحو الصدر وقصر في فتحة الانف والجفون الغائبة وتجعد الجلد وكذلك نزيف في الراس وتحت الجلد .
أوضحت نتائج الدراسة وجود ارتفاع معنوي (P<0.05) في المجاميع المعاملة جميعها على حد سواء ولمعايير الدم (عدد خلايا الدم البيض WBC , الهيموجلوبين Hb , نسبة الخلايا اللمفية Lym) ماعدا المجموعة الثانية (G2) حصل فيها انخفاض معنوي (P<0.05) في نسبة الخلايا اللمفية Lym مقارنة مع مجموعة السيطرة .
اشارت النتائج المناعية إلى حدوث ارتفاع معنوي (P<0.05) في مستويات السايتوكينات IL-6 و IL-17 في جميع المجاميع المعاملة خلال مدتي الحمل (18،7) يوم ، ماعدا المجموعة الثانية(G2) في اليوم 18 من الحمل والذي فيه حصل انخفاضا معنويا (P<0.05) لمستوى السايتوكينIL-17 ، بينما لوحظ انخفاض معنوي (P<0.05) في مستوى IL-6 في مجموعتي (G5,G6) لليوم السابع من الحمل مقارنة مع المجموعة الثانية(G2) لليوم 18 من الحمل ، في حين كان ارتفاع معنوي (P<0.05) لمستوى تركيز IL-17 لمجموعتي (G5,G6) لليوم السابع من الحمل مقارنة مع المجموعة الثانية(G2) لليوم 18 من الحمل .
إذ بينت نتائج الفحص المجهري للقوة الذرية Atomic Force Microscop (AFM) ان عملية التحميل قد اعطت مؤشرات تدل على نجاح هذه العملية من خلال وجود تغيرات على سطح المركبات النانوية المحملة بالعقار وأن جميع هذه التغيرات ضمن الحجوم والابعاد النانوية والتي تتوافق مع نتائج طيف الأشعة تحت الحمراء (FT-IR)Fourier transform infrared technique ، إذ كشفت صور فحص المجهر الالكتروني الماسح Scanning electron Microscopy (SEM) لمركب المورينجا النانوي AgNPs تجانس توزيع الجزيئات واغلب اشكال الجزيئات كروي .
نستنتج من الدراسة عند المعاملة بالمركب النانوي لمدة سبعة أيام محملا بالعقار اعطى نتائج مقاربة لمفعول العقار في تثبيط الالتهاب ولمدة 18 يوم مما قلل الوقت وتركيز الجرع لا غلب المجاميع وحصول تاثير واضح على الانغراس في قرني الرحم في اليوم السابع من الحمل والاجنة بعمر 18 يوم من الحمل في أناث الجرذان الحوامل بعد تحميل العقار على المركب النانوي الأخضر

An immuno-fetal study of the effect of ibuprofen loaded with green nanocomposite in pregnant female albino rats

The current study aimed to prepare and characterize the green nanocomposite from the leaves of the Moringa oleifera plant, improve its biological effectiveness, and evaluate its biological effectiveness before and after loading the drug ibuprofen into pregnant female rats and implanting their embryos.
This study was conducted in the laboratories of the College of Education for Pure Sciences / University of Karbala, and took place during the period from October 2022 to February 2023. 70 white rats were used, including ten males for pregnancy only and 60 female rats, and they were divided into six groups that included each A group of ten pregnant females. The first group (G1) was the control group, dosed with physiological saline solution. The second group (G2) was dosed orally with ibuprofen at a concentration of 166 mg/kg of body weight. The third group (G3) was dosed orally with the aqueous extract of moringa leaves. Oleifera at a concentration of 300 mg/kg of body weight. The fourth group (G4) was dosed orally with the nanocomposite at a concentration of 150 mg/kg of body weight. The fifth group (G5) was dosed orally with the aqueous extract of Moringa oleifera leaves loaded with ibuprofen at a concentration of (300+166). Milligrams/kg of body weight. The sixth group (G6) was dosed orally with the nanocomposite loaded with ibuprofen at a concentration of (150 + 166) milligrams/kg of body weight. The animals in all treated groups were dosed twice a day from the beginning of pregnancy until they were sacrificed at the end of the experiment.
Each group was divided into two secondary groups, each of which included five pregnant females. On the seventh day of pregnancy, the first secondary group was sacrificed to study the implantation sites, while the second secondary group was sacrificed on the 18th day of pregnancy to study the effect of treatments on the embryos. Blood from pregnant females on the day of sacrifice, for all treatments, and during the two stages of pregnancy (18 and 7) days respectively, noting that the duration of pregnancy in rats is (21) days.
The results of the study showed that there was a significant increase (P<0.05) in all treated groups and blood parameters (number of white blood cells (WBC), hemoglobin Hb, percentage of lymphocytes (Lym), except for the second group (G2), in which there was a significant decrease (P<0.05). In the percentage of Lymphocytes compared with the control group.
In the current study, the results of sections stained with hemotoxylin-eosin from the implantation sites of the female rats of the control group and the treated groups on the seventh day of pregnancy showed results similar to what is found in a natural pregnancy with implantation and the formation of shed tissue in the uterine lining first in the anti-mesenteric region, which is a sign of success. Implantation occurs at a time when the deciduous tissue is at its highest level of development and progress.
The results of the current study showed that the average number of fetuses was 8-9 in all groups except (G4, G6), in which there was a decrease in the number of fetuses, while there was a significant increase (P<0.05) in the number of destroyed fetuses in pregnant rats in the two groups (G5, G6).
A number of phenotypic abnormalities appeared in rat fetuses at 18 days of gestation in groups (G4, G5, and G6), which were represented by shortened forelimbs, a lowered arm, swelling in the upper part of the head, a curvature of the head toward the chest, a shortened nostril, absent eyelids, and wrinkling. Skin, as well as bleeding in the head and under the skin.
The immunological results indicated a significant increase (P<0.05) in the levels of cytokines IL-6 and IL-17 in all treated groups during the two periods of pregnancy (7 and 18 days), except for the second group (G2) on day 18 of pregnancy, in which A significant decrease (P<0.05) was observed in the level of the cytokine IL-17, while a significant decrease (P<0.05) was observed in the level of IL-6 in the two groups (G5, G6) on the seventh day of pregnancy compared with the second group (G2) on the 18th day of pregnancy, in While there was a significant increase (P<0.05) in the level of IL-17 concentration for the two groups (G5, G6) on the seventh day of pregnancy compared with the second group (G2) on the 18th day of pregnancy.
The results of the Atomic Force Microscope (AFM) showed that the loading process gave indications of the success of this process through the presence of changes on the surface of the nanocomposites loaded with the drug, and that all of these changes were within the nanoscale sizes and dimensions, which are consistent with the results of the infrared spectrum.(FT-IR)Fourier transform infrared technique. Scanning electron microscopy (SEM) images of the Moringa nanocomposite AgNPs revealed homogeneity in the distribution of the particles and most of the shapes of the particles are spherical.
We conclude from the study that treatment with the nanocomposite for seven days loaded with the drug gave results similar to the effect of the drug in inhibiting inflammation for a period of 18 days, which reduced the time and dose concentration without predominance of the groups and a clear effect on implantation in the uterine horns on the seventh day of pregnancy and in embryos at the age of 18 days of pregnancy In pregnant female rats after loading the drug onto the green nanocomposite