دراسة كيموحيوية لإنزيم البروتييز المنتج من الفطر Beauveria bassiana

2020-07-11

رسالة ماجستير

اسم الباحث : سرور محمد علي العبادي

الكلية : كلية العلوم

الاختصاص : علوم الحياة

سنة نشر البحث : 2012

تحميل الملف : اضغط هنا لتحميل البحث

المشاهدات: 17

 

أجريت هذه الدراسة لتحديد الظروف المثلى لإنتاج إنزيمي البروتييز والكايتينيز من الفطر Beauveria bassiana . كما شملت الدراسة تنقية جزئية لإنزيم البروتييز ودراسة بعض صفاته المهمة ، وأظهرت النتائج ما يأتي :

  • كانت الظروف المثلى لإنتاج الإنزيمين هي إستخدام وسط مكوّن من خميرة الخبز بنسبة 5 % المدعم بـ 0.3 % من كبريتات الأمونيوم برقم هيدروجيني ابتدائي 6.5 وحجم لقاح مقداره %16والحضن في الحاضنة الهزازة بدرجة حرارة 30 مْ بسرعة رج    150 دورة / دقيقة ولمدة 72 ساعة .

 

 

  • تم تنقية إنزيم البروتييز من الفطر bassiana جزئياً وقد إشتملت خطوات التنقية على الديلزة ثم الترسيب بالايثانول (70) % ثم التبادل الأيوني بإستخدام المبادل                    DEAE-Cellulose ، حيث حققت الخطوة الأخيرة عدد مرات تنقية2.13  مرة    بحصيلة إنزيمية 16.3 %  .

 

  • بعد توصيف إنزيم البروتييز ، أظهرت النتائج ما يأتي :

 

–1بلغت قيم ثابت ميكالس (Km) (4.34 و6.26 و6.66) ملغم / مل حيال الكازائين والجيلاتين والبومين المصل البقري كمواد تفاعل , على التوالي . في حين بلغت قيم السرعة القصوى (Vmax) (16.13 و16.66 و16.66) ملغم / مل . دقيقة حيال البروتينات الثلاثة المستخدمة في الدراسة , على التوالي أيضاَ .

 

–2 كان الرقم الهيدروجيني 9.0 هو الأمثل لفعالية إنزيم البروتييز ، في حين تراوح الرقم الهيدروجيني للثبات بين (8.0-10.0)  .

 

–3 أظهر الإنزيم  ثباتاً حرارياً بين (20-40) مْ لمدة 30 دقيقة  .

 

–4 تباين تأثير الأيونات المعدنية والمواد الكيمياوية المستخدمة في هذه الدراسة في فعالية إنزيم البروتييز , إذ أدى إستخدام مادة الـ PMSF بالتركيزين (1 و5) ملي مولر إلى تثبيط فعالية الإنزيم تماماً مما يدل على أن الإنزيم يعود إلى مجموعة البروتييز السيريني، بينما كان لكلوريد الكالسيوم (CaCl2) و كلوريد المغنيسيوم (MgCl2) تأثيراً حاثاً لفعالية الإنزيم .

 

 

 

 

 

 

Biochemical Study of Protease Enzyme from Beauveria bassiana

 

This study was carried out to investigate the optimal conditions for Protease production and chitinase from Beauveria bassiana  . The study also included a partial purification of this enzyme and characterization of some important properties , and the results showed the following :

 

 

  • The optimal conditions for the enzyme production from the fungus used in this study were using medium composed of baker’s yeast at concentration 1.5 % supplemented with 0.3 % (NH4)2 SO4 , at initial pH 6.5 with an inoculum size 16 % , and incubated at 30 ˚C on a rotary shaker at 150 rpm for 72 h.

 

  • Protease from culture filtrate of bassiana , were partially purified by dialysis , precipitation with 70% ethanol and DEAE-Cellulose ion exchange chromatography . The enzyme was purified by 2.13 fold with 16.3% yield .

 

  • The purified Protease was characterized . The results showed the following :

 

  • The Km values for protease were (4.34 , 6.25 and 6.66 ) mg/ml , against casein , gelatin and BSA as substrates , respectively . While the Vmax values were (16.13 , 16.66 and 16.66) mg/min for the three substrates , respectively too .

 

 

 

B-  The optimum pH for the Protease  activity was pH 9.0 ,  and it was stable in the pH range of (8.0-10.0)  .

 

  • The Protease showed heat stability at (20-40) ˚C  .

 

 

  • The efects of protease inhibitors and various metal ions on the enzyme activity were determined. Only in the presence of PMSF at (1 and 5) mM, the enzyme activity was strongly inhibited, indicating that protease enzyme belongs to the serine-type peptidase group,  While calicum chloride and magnesium chloride had stimulated effect on the enzyme activity  .