دراسة نسجية مرضية وكيموحيوية للدور الوقائي للمستخلص الكحولي لأوراق نبات المورينغا ضد الاجهاد التأكسدي المستحث ببنزوات الصوديوم في ذكور الأرانب البيض .

رسالة ماجستير

اسم الباحث : لقاء عبد الكريم قاسم الخالدي

اسم المشرف : أ.م.د جاسم حنون هاشم العوادي

الكلمات المفتاحية :

الكلية : كلية العلوم

الاختصاص : علوم الحياة

سنة نشر البحث : 2023

تحميل الملف : اضغط هنا لتحميل البحث

هدف هذه الدراسة هو تحديد التأثيرات النسجية المرضية لبنزوات الصوديوم على الكبد والكلى والتأثيرات الكيموحيوية على مستوى إنزيمات الكبد مثل (ALP) Alkaline phosphataseو ((AST Aspartate aminotransferase و (ALT) Alanine aminotransferase ، ومستوى مضادات الأكسدة الانزيمية مثل (SOD) Superoxide dismutaseو (CAT) Catalaseو ((GST Glutathione S-transferase ، والوقاية بواسطة مستخلص أوراق (المورينغا أوليفيرا) ضد الإجهاد التأكسدي بفعل بنزوات الصوديوم ، إذ أجريت هذه الدراسة في البيت الحيواني لكلية الطب البيطري وللمدة من2021/11/15 لغاية 2022/1/2 ، فقد تم استخدام (30) من ذكور الأرانب البيضاء النيوزلندية , إذ قُسمت عشوائياً إلى ست مجاميع كل منها ضمت خمسة أرانب ، وهي: مجموعة السيطرة السالبة C1 جرعت ماء مقطر ومجموعة السيطرة الموجبة C2 التي جرعت بمستخلص أوراق نبات المورينغا (200 ملغم/كلغم) من وزن الجسم ، ومجموعة T1 المعاملة بالتركيز العالي من بنزوات الصوديوم (500 ملغم/كلغم) ، ومجموعة T2 المعاملة بالتركيز الواطئ بنزوات الصوديوم (250 ملغم/كلغم) ، ومجموعة T3 المعاملة بمستخلص المورينغا (200ملغم/كلغم) والتركيز العالي من بنزوات الصوديوم (500 ملغم/كلغم)، ومجموعة T4 المعاملة بمستخلص المورينغا (200 ملغم/كلغم) والتركيز الواطئ من بنزوات الصوديوم (250 ملغم/كلغم) إذ تم تجريع المجاميع فموياً يومياً ولمدة 30)) يوماً .
بعد انتهاء التجربة وزنت الأرانب ، ثم سُحبت عينات الدم بواسطة طعنة القلب لغرض إجراء التحاليل الكيموحيوية ، وشُرحت الأرانب وأُستئصل الكبد والكلى لغرض التشخيص المرضي النسيجي، فأظهرت التغيرات الوزنية لجسم الارانب عدم وجود فروق معنوية لاوزانها قبل وبعد التجريع وكذلك لم تسجل نتائجنا أي فروق معنوية لأوزان الاعضاء ( الكبد والكلى اليمنى والكلى اليسرى) بين كل مجاميع الارانب .
وأما بالنسبة للتأثيرات الكيموحيوية، فقد أظهرت نتائج فعالية انزيمات الكبد ((ALP, AST عدم وجود فروق معنوية بين كل مجاميع الارانب ، وسجل انزيم ALT فروق معنوية (P <0.05) بين المجاميع ولوحظ وجود انخفاض معنوي فعالية انزيم ALT في مجموعة الأرانب التي جرعت بمستخلص المورينغا (200 ملغم/كلغم/وزن الجسم) بالمقارنة مع مجموعة السيطرة السالبة و بالمقارنة مع المجموعة التي جرعت بمستخلص المورينغا (200 ملغم/كلغم/وزن الجسم) وثم التركيز الواطيء من بنزوات الصوديوم (250 ملغم/كلغم/وزن الجسم) بمقدار(± 4.085 9.486).
ولوحظ انخفاض معنوي (P<0.05)في فعالية انزيم ALT في مجموعة الأرانب التي جرعت بالتركيز العالي من بنزوات الصوديوم (500 ملغم/كلغم/وزن الجسم) مقارنة بمجموعة السيطرة السالبة وبالمقارنة مع المجموعة التي جرعت بمستخلص المورينغا (200 ملغم/كلغم/وزن الجسم) وثم التركيز الواطيء من بنزوات الصوديوم (250 ملغم/كلغم/وزن الجسم) بمقدار ±5.921) 11.06).
وسجل انخفاض معنوي (P<0.05)في فعالية انزيم ALT في مجموعة الارانب التي جرعت بالتركيز الواطيء من بنزوات الصوديوم (250 ملغم/كلغم/وزن الجسم) مقارنة بمجموعة السيطرة السالبة وبالمقارنة مع المجموعة التي جرعت بمستخلص المورينغا (200 ملغم/كلغم/وزن الجسم) وثم التركيز الواطيء من بنزوات الصوديوم (250 ملغم/كلغم/وزن الجسم) بمقدار±8.498) 10.94).
وسجلت النتائج وجود انخفاض معنوي في فعالية انزيم ALT في مجموعة الأرانب التي عولجت بمستخلص أوراق المورينغا أوليفيرا (200 ملغم/كلغم /وزن الجسم) ثم عوملت بالتركيز العالي من بنزوات الصوديوم (500 ملغم/كلغم/وزن الجسم) بالمقارنة مع مجموعة السيطرة السالبة وبالمقارنة مع المجموعة التي جرعت بمستخلص المورينغا (200 ملغم/كلغم/وزن الجسم) وثم التركيز الواطيء من بنزوات الصوديوم (250 ملغم/كلغم) بمقدار5.422)± 7.915 ).
وأشارت نتائج التحليل الإحصائي لفعالية مضادات الاكسدة الانزيمية SOD) و (GSTإلى وجود فروق ذات دلالة إحصائية (P<0.05)في المجاميع المعالجة . سجلت نتائجنا انخفاضاً معنوياً في فعالية انزيم SOD لمجموعة الارانب المعاملة بمستخلص أوراق المورينغا (200 ملغم/كلغم/وزن الجسم) ثم التركيزالواطىء من بنزوات الصوديوم (250 ملغم/كلغم/وزن الجسم) بمقدار (0.447 ± 0.119) بالمقارنة مع مجموعة السيطرة السالبة .
وقد سجلت النتائج عدم وجود فروق معنوية في فعالية مضاد الاكسدة CAT، وسجلت النتائج أيضاً ارتفاعاً معنوياً في فعالية انزيم GST لمجموعة الأرانب المعاملة بالتركيز العالي من بنزوات الصوديوم (500ملغم/كلغم/وزن الجسم) بمقدار (0.602±0.1003) بالمقارنة مع مجموعة السيطرة السالبة، ولوحظ أنخفاضاً معنوياً في فعالية انزيم GST في مجموعة الأرانب المعاملة بالتركيز الوطيء من بنزوات الصوديوم (250ملغم/كلغم/وزن الجسم) بمقدار(0.187±0.097) بالمقارنة مع مجموعة الأرانب المعاملة بالتركيز العالي من بنزوات الصوديوم , وفي الأرانب المعاملة بمستخلص أوراق المورينغا (200 ملغم/كلغم/وزن الجسم) بمقدار (0.242 ± 0. 084) بالمقارنة مع مجموعة الأرانب المعاملة بالتركيز العالي، وفي مجموعة الأرانب المعاملة بمستخلص أوراق المورينغا اوليفيرا (200ملغم/كلغم/وزن الجسم) ثم التركيزالعالي من بنزوات الصوديوم (500 ملغم/كلغم/وزن الجسم) بمقدار (0.185±0.169) بالمقارنة مع مجموعة الأرانب المعاملة بالتركيز العالي ، وفي مجموعة الأرانب المعاملة بمستخلص أوراق المورينغا اوليفيرا (200ملغم/كلغم/وزن الجسم) ثم التركيزالواطىء من بنزوات الصوديوم (250 ملغم/كلغم/وزن الجسم) بمقدار (0.209±0.099) بالمقارنة مع مجموعة الأرانب المعاملة بالتركيز العالي .
وأظهرت تغيرات نسيجية للمجاميع المعاملة ببنزوات الصويوم (500 أو 250 ملغم/كلغم/وزن الجسم) في أنسجة الكبد متمثلة بإحتقان دموي في الوريد المركزي ، وتدمير التركيب الشعاعي للخلايا الكبدية المرتبة حول الوريد المركزي وكثرة ارتشاح خلايا كوبفر ، ووجود عدد من الخلايا الميته ، وتنكس دهني متمثل بتراكم الدهون. في حين أظهرت أنسجة الكلى انكماش الكبيبة الكلوية، وزيادة فراغ بومان، وكثرة الخلايا الالتهابية، وتوسع في النبيبات البولية ، وتنخر في الخلايا المبطنه للنبيبات البولية فضلاً عن تراكم الدهون .
بينما أظهرت التغيرات النسيجية للمجاميع المعاملة بمستخلص أوراق المورينغا اوليفيرا (200ملغم/كلغم/وزن الجسم) ثم تراكيز من بنزوات الصوديوم (500 أو 250 ملغم/كلغم/وزن الجسم) في أنسجة الكبد عن المظهر الطبيعي لنسيج الكبد ، وقلة ارتشاح خلايا كوبفر، ووجود عدد ضئيل من الخلايا الدهنية الزيتية microstatiosis ، وانتظام الخلايا الكبدية بشكل حبال حول الوريد المركزي لفصيص الكبد مع ظهور تحسن في نسيج الكبد، وربما يُعزى ذلك للتأثير الوقائي لمستخلص أوراق المورينغا أوليفيرا . بينما أظهرت أنسجة الكلى مظهراً طبيعياً نوعاً ما للكبيبات الكلوية، وتوسع بسيط في بعض النبيبات البولية مع ارتشاح بسيط لبعض الخلايا الالتهابية ، وتنخر في الخلايا المبطنه للنبيبات البولية، مع تحسن جزئي لنسيج الكلية وربما يعود السبب لأستعمال مستخلص أوراق المورينغا.
وأظهر لب الكلية النبيبات البولية طبيعية مع وجود قليل لبعض الخلايا الالتهابية بين النبيبات البولية فضلاً عن وجود Hyaline cast وارتشاح وتراكم المواد البروتينية في النبيبات البولية لبعض الأرانب ووجود عدد قليل من الخلايا الدهنية.
ويمكن أن نستنتج من خلال نتائج دراستنا إنّ مستخلص أوراق المورينغا أوليفيرا أدى إلى تقليل الأثار السلبية لبنزوات الصوديوم على مستوى المعايير الكيموحيوية في الدم والبنية النسيجية المرضية للكبد والكلى للأرانب التي عوملت ببنزوات الصوديوم .

Histopathological and biochemical study of the protective role of alcoholic extract of Moringa leaves against sodium benzoate -induced

The aim of this study is to determine the histopathological effects of sodium benzoate on the liver and kidneys and the biochemical effects on the level of liver enzymes such as Alkaline phosphatase )ALP), Aspartate aminotransferase (AST), Alanine aminotransferase (ALT) ,and antioxidant enzymes such as Superoxide dismutase (SOD) , Catalase (CAT) ,Glutathione S-transferase (GST) and protection by Moringa Oleifera leaf extract against oxidative stress by the action of sodium benzoate . as This study was conducted in the animal house of veterinary medicine and for the period from 11/15/2021 to 1/2/2022 , Thirty white rabbits (male) were used, as they were divided randomly into six groups, Each of group includes Five rabbits ,which categorized as the negative control group (C1) where they given a distilled water ; and the positive control group (C2) that dosed with moringa leaf extract (200mg/kg of body weight) ; group T1 that treated with high concentration of sodium benzoate (500mg/kg) ; group T2 which treated with low concentration of sodium benzoate (250mg/kg) ; group T3 that treated with a both moringa extract (200mg/kg) , and a high concentration of sodium benzoate (500mg/kg) and group T4 which treated with both moringa extract (200mg/kg) and a low concentration of sodium benzoate (250mg/kg) . all the groups were administrated orally daily for (30) days.
At the end of the experiment , rabbits were weighted , and blood samples were drawn by heart stab for the purpose of performing the biochemical analyses, then the rabbits were dissected to extract the liver and kidneys for histopathological diagnosis . The body weight changes of rabbits showed that there were no significant differences in their weights before and after dosing, as well as our results did not record any significant differences in the weights of organs (liver, right kidney and left kidney) among all groups of rabbits.
for the biochemical effects, the results of the activity of liver enzymes (ALP, AST) showed that there were no significant differences between all groups of rabbits. The ALT enzyme recorded significant differences (p < 0.05) between the groups, and a significant decrease in the activity of the ALT enzyme was observed in the group of rabbits that were dosed with Moringa extract (200 mg/kg/body weight) compared to the negative control group and compared to the group that was dosed with Moringa extract (200/kg/body weight) and then the low concentration of sodium benzoate (250 mg/kg/body weight) by (4.085 ± 9.486).
A significant decrease (P<0.05) was observed in the activity of ALT enzyme in the group of rabbits that were dosed with a high concentration of sodium benzoate (500 mg/kg/body weight) compared to the negative control group and in comparison with the group that was dosed with Moringa extract (200 mg/kg/body weight) and then the low concentration of sodium benzoate (250 mg / kg / body weight) by (11.06 ± 5.92).
A significant decrease (P<0.05) was recorded in the activity of the ALT enzyme in the group of rabbits that were dosed with a low concentration of sodium benzoate (250 mg/kg/body weight) compared to the negative control group and in comparison with the group that was dosed with Moringa extract (200 mg/kg/body weight) and then the low concentration of sodium benzoate (250 mg / kg / body weight) by (10.94 ± 8.498).

The results recorded a significant decrease in the activity of ALT enzyme in a group of rabbits that were treated with Moringa oleifera leaf extract (200 mg/kg/body weight) and then treated with a high concentration of sodium benzoate (500 mg/kg/body weight) compared with the negative control group and compared with The group that was dosed with Moringa extract (200 mg/kg/body weight) and then a low concentration of sodium benzoate (250 mg/kg) by (5.422 ± 7.915).
The results of the statistical analysis indicated that there were statistically significant differences (P<0.05) in the activity of enzymes antioxidant (SOD and GST) in the treated groups.
Our results recorded a significant decrease in the activity of the SOD enzyme for a group of rabbits that treated with moringa leaf extract (200mg/kg of body weight) followed by a low concentration of sodium benzoate (250 mg/ kg of body weight) (0.053±0.447) compared with the negative control group . and the results recorded no significant differences (P>0.05) in the activity of the antioxidant CAT compared with all groups .
The results also recorded a significant increase in the activity of the GST enzyme for the group of rabbits that treated with a high concentration of sodium benzoate (500mg/kg of body weight) by (0.6020±0.1053) compared with the negative control group, and a significant decrease was observed in the activity of the GST enzyme in the group of rabbits that treated with low concentration of sodium benzoate (250mg/kg of body weight ) by ( 0.1870±0.097) compared with the group of rabbits treated with high concentration of sodium benzoate , and in rabbits treated with moringa leaf extract (200mg/kg of body weight) by (0.242±0.084) compared with the groups of rabbits that treated with the high concentration of sodium benzoate and in rabbits groups treated with leaf extract moringa (200mg/kg of body weight) and then the high concentration of sodium benzoate (500mg/kg body weight) with an amount of (0.1850±0.169) compared to the group of rabbits treated with high concentration , and in the group of rabbits treated with leaf extract Moringa Oleifera (200mg/kg body weight) followed by the low concentration of sodium benzoate (250 mg/ kg body weight ) by (0.099±0.209) compared with the group of the rabbits treated with the high concentration .
As a result , a histological changes appeared in the groups treated with sodium benzoate (500 or 250 mg/kg/bw) in the liver tissues represented by bloody congestion in the central vein , the destruction of the radial structure of the hepatocytes arranged around the central vein , and frequent infiltration of kupffer cells , the presence of a number of dead cells , and steatosis represented by the accumulation of fat. While kidney tissue showed shrinkage of the renal glomerulus, increased Bowman’s vacuole and inflammatory cell counts , dilatation of the urinary tubules, necrosis in the cells lining the urinary tubules, as well as the accumulation of fat.
While the histological changes of the groups that treated with Moringa Oleifera leaf extract (200mg/kg of body weight) followed by concentrations of sodium benzoate (500 or 250 mg/kg of body weight ) in the liver tissues a normal appearances of the liver tissue , lack of Kupffer cells infiltration , and the presence of a small number of oleaginous cells (microsteatosis) , and arrangement of hepatocytes in the form of a granule around the central vein of the liver lobule with an improvement in liver tissue . This could be attributed to the protective effect of Moringa Oleifera leaf extract. While the kidney tissues showed a normal appearance of the renal glomeruli ; a slightly expansion in some urinary tubules with slight infiltration of some inflammatory cells, and necrosis in the cells lining the urinary tubules , with a partial improvement of the kidney tissue , which probably due to the use of moringa leaf extract.
The kidney pulp showed a normal urinary tubules with the presence of some inflammatory cells between the urinary tubules , as well as the presence of hyaline cast , infiltration and accumulation of protein substances in the urinary tubules of some rabbits , and the presence of a small number of fat cells.
We can conclude from the results of our study that the Moringa Oleifera leaf extract reduced the negative effects of sodium benzoate on the level of biochemical parameters in the blood and histopathological structure of the liver and kidneys of rabbits that were treated with sodium benzoate.