استخلاص وتنقية الفلافونويدات من أوراق الشاي الأخضر وقشور الرمان و تحديد فعاليتها المضادة للأكسدة

2020-06-19

رسالة ماجستير

اسم الباحث : زهراء رحيم كاظم المرشدي

الكلية : كلية العلوم

الاختصاص : علوم الحياة

سنة نشر البحث : 2012

تحميل الملف : اضغط هنا لتحميل البحث

المشاهدات: 1٬413

تضمنت الدراسة الحالية استخلاص الفلافونويدات و الفينولات الكلية و مضادات الاكسدة من أوراق الشاي الأخضر وقشور الرمان, كما تمت تنقية الفلافونويدات من المستخلصين المذكورين , وأظهرت النتائج ما يأتي :-

  • بعد اجراء غربلة لاثني عشر مستخلص نباتي اشتملت على أوراق التفاح والحناء والطرفة والسدر والشاي الاخضر وقشور الرمان واللالنكي والليمون الاخضر ولحاء الجوز وسيقان الاسل وجذور الهندباء وازهار الكوجرات , لوحظ تفوق مستخلصي الشاي الأخضر وقشور الرمان من ناحية المحتوى الفلافونويدي و الفينولي و مضادات الاكسدة لذا فقد تم استعمال هذين المستخلصين في جميع مراحل الدراسة اللاحقة .
  • كان الايثانول بتركيز (30 و50)% هو الافضل لاستخلاص مضادات الاكسدة من اوراق الشاي الاخضر وقشور الرمان ,على التوالي . بينما كان الاسيتون بتركيز (70 و80) % هو الافضل لاستخلاص الفلافونويدات من المستخلصين المذكورين أعلاه , على التوالي ايضا, في حين كان الايثانول 80% والميثانول 70% هما المذيبان الافضلان لاستخلاص الفينولات الكلية من النباتين المذكورين ,على التوالي.
  • ان مدة الاستخلاص المثلى لمضادات الاكسدة والفينولات الكلية بلغت 24 ساعة لكلا المستخلصين بينما بلغت 36 و48 ساعة لاستخلاص الفلافونويدات من أوراق الشاي الاخضر وقشور الرمان ,على التوالي .
  • تم دراسة تأثير تراكيز عدة من مستخلصي اوراق الشاي الاخضر و قشور الرمان ضد بكتريا   aureus و P. aeruginosa و E. coli و S. pneumoniae و K. pneumoniae و كانت التراكيز المستخدمة هي (1 و 3 و 5 و 10 و 25 و 50 و 75 و 100) ملغم/مل باستعمال طريقة الانتشار في الاكار بوساطة الحفر (Agar well diffusion method) و كالاتي:
  • اعطى مستخلص اوراق الشاي الاخضر اعلى فعالية تثبيطية بتركيز 100ملغم/مل ضد بكتريا aeruginosa إذ بلغ قطر التثبيط  19ملم و هو مقارب لمضاد الجنتامايسين الذي بلغ قطر تثبيطه  20ملم بتركيز  10مايكروغرام/مل بينما سجل مستخلص قشور الرمان اعلى قطر تثبيط ضد نفس البكتريا و بلغ  25ملم و هو اعلى من قطر تثبيط مضاد الجنتامايسين بتركيز 10مايكروغرام/مل و اقل من الجنتامايسين بتركيز  100مايكروغرام/مل.
  • سجلت اقل فعالية لمستخلص اوراق الشاي الاخضر و قشور الرمان ضد بكتريا pneumoniae اذ بلغ قطر التثبيط (12 و 20) ملم ,على التوالي.
  • تمت تنقية الفلافونويدات من مستخلصي اوراق الشاي الاخضر و قشور الرمان واشتملت خطوات التنقية على الاستخلاص بالايثانول 30% لاوراق الشاي الاخضر و50% لقشور الرمان , تبعها الاستخلاص بالايثانول 95% لكلا المستخلصين وأخيراﹰ كروماتوغرافيا الادمصاص باستعمال الهلام Sephadex LH-20 اذ بلغت نسبة الفلافونويدات الى الفينولات الكلية (34.02 و37.7 و40.16) % لخطوات التنقية الثلاث , على التوالي لمستخلص أوراق الشاي الاخضر في حين بلغت نسبتها (36.72 و 79.15 و93.48)% لمستخلص قشور الرمان ,على التوالي ايضا.

عند فصل الفلافونويدات المنقاة بكروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة (TLC) لوحظ ظهور بقعة واحدة لمستخلص قشور الرمان بقيمة Rf مقدارها 0.837 في حين لوحظ ظهور بقعتين لمستخلص اوراق الشاي الاخضر بقيم Rf 0.856 و 0.91, على التوالي, مقارنة بقيمة Rf  للكويرستين القياسي و التي بلغت 0.923.

Extraction and Purification of Flavonoids from Green Tea Leaves and Pomegranate Peels and determination of their Antioxidant Activities

       This study included the extraction of flavonoids , total phenols and antioxidant from green tea leaves and pomegranate peels extracts , as well as flavonoids purification from the extracts foregoing , the result revealed the following:-

  • After the screening of 12 plant extracts including Pyrus malus , Lawsonia inermis , Camellia sinensis , Tamarix mannifera , Ziziphus jujubae leaves and Punica granatum , Citrus reticulate , Citrus limon peels and Juglans regia bark , Juncus maritimus stems , Cichorium intybus roots and Hibiscus sabdariffa flowers , the results showed that green tea leaf and pomegranate peels extracts contain the highest amounts of flavonoids , total phenols and antioxidants and therefore chosed for furthure studies.
  • The best solvent for antioxidants extraction from green tea leaves and pomegranate peels extracts was ethanol in concentrations (30 and 50) % for both extracts, respectively. While the acetone in concentrations (70 and 80) % was the best for flavonoids extraction from both extracts, respectively. Whereas ethanol (80)% and methanol (70)% were the best solvents for total phenols extraction from both extracts, respectively.
  • The best extraction time that gave the highest amount of antioxidants and total phenols was 24 hours, for both extracts. While it was found that (36 and 48) hours were the best for flavonoids extraction from green tea leaves and pomegranate peels, respectively.
  • The results revealed that the two extracts possessed antibacterial activity towards some of gram positive and negative bacteria , and the minimum inhibitory concentration (MIC) were (5,50,50,5 and 75)mg/ml and (3,50,50,3 and 50)mg/ml for green tea leaves and pomegranate peel extracts respectively against aureus, Streptococcus pneumonia, P. aeruginosa, E. coli and Klebsiella pneumonia, respectively.
  • The flavonoids were purified from green tea leaves and pomegranate peels extracts and the purification procedure included the extraction with (30 and 50)% ethanol from green tea leaves and pomegranate, respectively, extraction with ethanol (95)% for both extracts and finally using adsorption chromatography with Sephadex LH – 20 gel , where the ratio of flavonoids to total phenols reached (34.02,37.7 and 40.16)% for the three purification steps of green tea leaves extracts while it reached to (36.72,79.15 and 93.48)% for pomegranate peels extracts.
  • The purified flavonoids from pomegranate peels extract showed a single spot when separated with thin layer chromatography with Rf value of (0.837) while the purified flavonoids from green tea leaves extract showed two spots with Rf value of (0.856 and 0.91) in comparison with Rf value for standard quercetin which reached to (0.923).