University of Kerbala
اسم الباحث : هبة عقيل مسلم القريشي
اسم المشرف : أ. د. فاضل جواد آل طعمة أ. د. هناء عداي علي السلطاني
الكلمات المفتاحية :
الكلية : كلية الطب
الاختصاص : الكيمياء السريرية
سنة نشر البحث : 2022
تحميل الملف : اضغط هنا لتحميل البحث
تعد متلازمة تكيس المبايض (PCOS) واحدة من أكثر اضطرابات الغدد الصماء والأيض شيوعًا. وهو اضطراب غير متجانس يتميز بخلل التبويض المزمن وفرط الأندروجين. إن التسبب في مرض متلازمة تكيس المبايض معقد له عدة اسباب منها التفاعل الجيني والبيئي ونمط الحياة.
تم ربط مؤشرات الالتهاب والتهابات منخفضة الدرجة بمتلازمة تكيس المبايض. لأن الإباضة عملية شبه التهابية ، يمكن للأنسجة الدهنية البطانية أن تحفز الاستجابة الالتهابية وتحافظ على الالتهاب في الخلايا الشحمية من خلال التأثير على إطلاق السيتوكينات الالتهابية. من هذا الالتهاب المنظم ، يمكن أن تنشأ متلازمة تكيس المبايض. يعد انترلوكين 10 (IL-10) أحد أفراد عائلة الخلايا التائية المساعدة (TH2) الذي يثبط وظيفة الخلايا (TH1). للحفاظ على عمل المبيض بشكل صحيح ، يجب أن تكون مستويات علامات الالتهاب في حالة اتزان. قد تنجم التعديلات في تكوين الستيرويد وتأخر النضج الجريبي ومشاكل المبيض عن عدم التوازن بين السيتوكينات الداعمة للالتهابات والمضادة للالتهابات.
اما بالنسبة لموت الخلايا المبرمج في الخلية الحبيبية فهو السبب الرئيسي للضمور الجريبي. تظهر نساء متلازمة تكيس المبايض (PCOS) أكثرعدد من الجريبات الناضجة والتي تضمردون الانتقال إلى جريبات سائدة ، مع موت الخلايا المبرمج غير الطبيعي للخلايا الحبيبية يساهم في تكوّن الجريبات المتكيّسة. يؤدي ذلك إلى عدم الإباضة والعقم. يلعب موت الخلية المبرمج( سيتوكين (PD-1وظائف مثبطة مهمة جدًا في الالتهابات وأمراض المناعة الذاتية وكذلك الأورام. مع العلم من أنه لم يتم تسجيل الارتباط بين تعدد الأشكال الجيني PD-1 (rs2229782) مع حدوث متلازمة تكيس المبايض حتى الان.
هدفت هذه الدراسة إلى استكشاف ما إذا كانت النساء المصابات بمتلازمة تكيس المبايض لديهن أي اختلاف في مستويات PD-1 و IL-10 مقارنة بالنساء غير المصابات بمتلازمة تكيس المبايض. أيضًا ، للتركيز على تحديد أي ارتباط بين مستويات PD-1 و IL-10 والمعلمات الهرمونية لدى النساء المصابات بالـ PCOS. ودراسة تعدد الأشكال الوراثي لجين PD-1 في النساء من متلازمة تكيس المبايض كتشخيص مبكر للمضاعفات ولتحديد الارتباط بين علامات الالتهاب والنتيجة من الأنماط الجينية.
تصميم دراسة مرضى واصحاء لـ 160 امرأة تتراوح أعمارهم بين (18-40) عامًا شملت 80 مريضًا من متلازمة تكيس المبايض و 80 امرأة غير مصابة بمتلازمة تكيس المبايض كمجموعة اصحاء جميعهم في سن الإنجاب في استشارية الخصوبة الإنجابية بمستشفى أمراض النسائية والتوليد التعليمي بدائرة صحة كربلاء العراق وكلية الطب ، جامعة كربلاء ، العراق خلال الفترة من كانون الأول (ديسمبر) 2021 إلى آب (أغسطس) 2022. تم افتراض معايير روتردام – 2003 للإناث من متلازمة تكيس المبايض. تم قياس المستويات الهرمونية لكل من الهرمون اللوتيني LH وهرمون التحفيز الجريبي FSH والبرولاكتين بواسطة نظام المقايسة المناعية الآلية كيميائيًا. وتم قياس مستوى هرمون التستوستيرون الحر FT بواسطة مقايسة مناعية إنزيمية تنافسية باستخدام مجموعة ELISA كما تم استخدام مبدأ sandwich-ELISA لتحديد مستوى PD-1 ومستوى IL-10 . لقد تم قياس مؤشر كتلة الجسم BMI ونسبة الخصر إلى الورك WHR في هذه الدراسة. تم استخلاص الحمض النووي لكل عينة دم باستخدام مجموعة استخراج الحمض النووي الجينومي المحضّر. ثم تم تخزين الحمض النووي الجيني في درجة حرارة -20 درجة مئوية حتى الاستخدام. تم التنميط الجيني SNP لـ PD-1 (rs2227982) باستخدام التنميط الجيني التقليدي في الوقت الحقيقي PCR . GoTaq Qpcrتم استخدام لوحة الرسم البياني Prism 9.0.0 و SPSS 25 لجميع الحسابات الإحصائية
أظهرت نتيجة هذه الدراسة ارتفاعات كبيرة في تركيزات LH (p <0.001) ، ونسبة LH / FSH (p <0.001) ومستوى هرمون التستوستيرون الحر (p <0.001) ، ومستوى البرولاكتين (p <0.0001) ومستوى PD-1 (p. = 0.01) كانت سائدة في مجموعة مرضى متلازمة تكيس المبايض عند مقارنتها مع مجموعة التحكم. بينما انخفض بشكل ملحوظ في مستوى FSH (P = 0.01) ومستوى IL-10 (P <0.0001) خلال تقييم مشابه بين مرضى متلازمة تكيس المبايض ومجموعة التحكم. PDCD-1 (rs2227982) ارتبط النمط الجيني GA بشكل كبير مع تكرار أعلى للقيمة PCOS (p=0.0151) ، OR (2.728) ، CI 95) ٪ 1.230 إلى 5.977(و PDCD-1 ترددات أليل جين (rs2227982) كان للأليل أهمية القيمة (p=0.0237) ، OR (2.393) ، 1.197 إلى 4.815 CI 95٪ مع مريض متلازمة تكيس المبايض.
وفقًا للبيانات المسجلة ، خلصت الدراسة الحالية إلى أن مستوى بروتين موت الخلية المبرمج 1-PD زاد في مرضى متلازمة تكيس المبايض بينما انخفض مستوى IL-10 مقارنةً بالاصحاء. أيضًا ، يرتبط النمط الجيني GA لجين PD-1 (rs2227982) بشكل كبير مع القابلية للإصابة.
Molecular Basis of Programmed Cell Death-1 and Their Association with its Encode Protein and Interleukin-10 in Patients with Polycystic Ovary Syndrome in Kerbala Governorate
Polycystic ovarian syndrome (PCOS) is one of the most common endocrine and metabolic disorders. The etiopathogenesis of PCOS is complex genetic, environmental and lifestyle interaction.
Low-grade inflammation and inflammatory indicators have been linked to PCOS. Because ovulation is a semi-inflammatory process, visceral adipose tissue can induce an inflammatory response and sustain the inflammation in adipocytes by influencing the release of inflammatory cytokines. Out of this regulated inflammation, PCOS can arise.
Apoptosis in granulosa cell is the main cause of follicular atrophy. PCOS women display more maturing and following atrophic follicles that not pass into dominant follicles that lead to anovulation and infertility. Programmed cell death-1cytokin (PD-1) play very important inhibitory functions in inflammation and autoimmune diseases as well as tumors. Although, if the PD-1 gene polymorphisms (rs2229782) are associated with the incidence of PCOS has not been recorded yet.
This study was aimed to explore whether women with PCOS have any difference in PD-1 and IL-10 levels compared to control group. Also, to determine any association between PD-1 and IL-10 levels and hormonal parameters in PCOS women. And, to study the genetic polymorphism of PD-1 gene in PCOS and to determine the correlation between inflammatory markers and the resultant of genotypes.
A case-control study design of 160 subject with age ranged between (18 – 40) years involving 80 PCOS patients and 80 apparently healthy women as a control in childbearing age at the Reproductive Fertility consultant of gynecological and obstetric teaching hospital, Kerbala health directorate Iraq and College of Medicine, University of Kerbala Iraq during the duration from Dec., 2021 to Aug., 2022. The Rotterdam criteria-2003 was presumed to PCOS females. The hormonal levels of each of Luteinizing hormone (LH), Follicular Stimulating Hormone (FSH) and prolactin were measured by the chemiluminescent automated immunoassay system. Free testosterone (FT) level was measured by competitive enzyme immunoassay using ELISA kit and the sandwich-ELISA principle was used to determined PD-1 level and IL-10 level. Body mass index (BMI) and Waist Hip Ratio (WHR) were measured in this study. Each blood sample had its genomic DNA extracted using the genomic DNA extraction kit. The genomic DNA was stored at -20 c until use. The SNP of PD-1 (rs2227982) was genotyped using Taqman real-time PCR. The graph pad Prism 9.0.0 and SPSS 25 were used for all statistical calculations.
The result of this study demonstrated significant elevations in LH concentrations (p<0.001), LH/FSH ratio (p<0.001) and free testosterone level (p<0.001), prolactin level (p<0.0001) and PD-1 level (p=0.01) were prevailed in the PCOS patients group when contrasted with the control group. while significantly decrease in FSH level (P=0.01) and IL-10 level (P<0.0001) during a comparable evaluation between PCOS patients and control group. PD-1 (rs2227982) GA genotype was related significantly with a higher frequency of PCOS p-value (0.0151), OR (2.728), CI 95% 1.230 to 5.977 and PD-1gene allele frequencies (rs2227982) A allele had significance p-value (0.0237), OR (2.393), CI 95% 1.197 to 4.815 with PCOS patient.
According to the present study concludes that PD-1 level increased in PCOS patients while IL-10 level decreased as compared with control. Also, the GA genotype of PD-1 gene (rs2227982) is significantly associated with a susceptibility of PCOS in Iraqi women and there is significant association between PD-1 level and PD-1 gene (rs2227982) GA genotype in the registered PCOS and control group.
