التوصيف الجزيئي للمكورات العنقودية الذهبية المعزولة من الحليب ومشتقاته

دبلوم عالي

اسم الباحث : محسن باسين طه

اسم المشرف : أ.م.د. علي جاسم جعفر أ.م.د حيدر علي محمد

الكلمات المفتاحية : "accumulation associated proteins Aap accessory gene regulاator Agr antimicrobial resistance AMR community-associated MRSA CA-MRSA Clinical and Laboratory Standards Institute CLSI coagulase negative staphylococci CoNS clumping factor Clf coagulase positi

الكلية : كلية الطب البيطري

الاختصاص : علوم الطب البيطري

سنة نشر البحث : 2023

تحميل الملف : اضغط هنا لتحميل البحث


الخلاصة
تعد المكورات العنقودية الذهبية هي المسبب للأمراض تلوث الحليب ومنتجات الألبان مسببة للتسمم الغذائي بسبب إنتاج السموم المعوية بشكل أساسي ، ولديها ذخيرة من عوامل الضراوة ، وآليات مقاومة المضادات الحيوية المتعددة ، وقدرتها على تكوين الأغشية الحيوية ، بالإضافة إلى قدرتها على اكتساب جديد جينات المقاومة عبر إنتجرون ، مما قد يؤدي إلى صعوبة العلاج. لهذه الأسباب ، تهدف الدراسة إلى تحديد معدل الانتشار ، ودقة بعض أنماط الفوعة وتكوين الأغشية الحيوية في المكورات العنقوديه الذهبية المعزولة من الحليب ومشتقاته (Iccd ، mecA, femA, Icca)
تم إجراء دراسة مقطعية لجمع إجمالي 300 عينة مقسمة إلى ست مجموعات 50 عينه لكل من(حليب بقري خام، حليب مستورد ، منتجات ألبان مستوردة ، منتجات ألبان محلي(مصانع) ، ومنتجات ألبان مزرعة وحليب جاموس خام ) ، بدأت الدراسة من شهر تشرين الاول 2022 الى شباط 2023. جمعت العينات عشوائيا من مواقع مختلفة في مدن كربلاء. تم التعامل مع العينات باستخدام الطرق البكتريولوجية والكيميائية الحيوية لعزل والتعرف على بكتيريا S. aureus ، ثم تم إجراء اختبارات إنتاج الأغشية الحيوية واختبارات الحساسية للمضادات الميكروبية. تم استخدام الأدوات الجزيئية لدراسة انتشار بعض جينات الفوعة (mecA ، femA ، Icaa و Icad) وتم فحص قدرة Staphylococcus aureus على إنتاج إنزيم β-lactamase بطريقة(Idometric assay)
من بين 300 عينة تم استزراعها وتحديدها ، 121 (40.3٪) ، وصفت كعزلات S. aureus ، وتم توزيعها كحليب بقري خام 17 (34٪) ، حليب مستورد 13 (26٪) ، منتجات ألبان مستوردة 18 (36٪) ، منتجات الألبان مصنعه محليًا 23 (46٪) ، منتجات الألبان الحقلية 30 (60٪) و حليب الجاموس الخام 20 (40٪).
فيما يتعلق بمعدلات مقاومة S. aureus للمضادات الحياتية ، كانت العزلات في أغلب الأحيان مقاومة للبنسلين G 61 (50,76%),والأوكساسيلين 49 (40.49٪) ولكنها أكثر عرضة للسيبروفلوكساسين (100٪) والجنتامايسين (100٪) ، الأزيثروميسين 89 (73.66٪) ، الإريثرونيسين. (63.24٪) والتتراسيكلين 52 (42.9٪).
علاوة على ذلك ، كان الانتشار الجزيئي والنسبة المئوية لجرثومة MRSA اعتمادًا على اكتشاف جين mecA 49) (40,49والباقي 72 (59،50). تم تسجيل الانتشار الجزيئي لـ MRSA بين المجموعات المختلفة مثل حليب البقر الخام. 7 (41،17٪) ، حليب مستورد 6 (46،15٪) ، منتجات ألبان مستوردة 7 (38،88٪) ، منتجات ألبان محلية (مصنع) 9 (39،13٪) ، منتجات ألبان مزرعة 12 (40٪) وحليب الجاموس الخام 8 (40٪).
كان معدل إنتاج الأغشية الحيوية في بكتيريا S. aureus الكلية 100٪ ، وقد قسمت النتيجة إلى ثلاث مراحل (تكوين غشاء قوي ،وغشاء متوسط ،وغشاء ضعيف). كانت النسبة المئوية لهذه المراحل بين منتجات الألبان المختلفة ، قوية لتكوين الغشاء 74 (62،5٪) ، معتدل لنكوين الغشاء 28 (22.08٪) و ضعيف لتكوين الغشاء 19(15.42٪) .
من ناحية أخرى ، كان عدد ونسبة جين Icaa في جميع عينات 81 S.aureus (67,86) موزعة على مجموعات الدراسة . حليب بقري خام 12 (70.59٪) ، حليب مستورد 10 (76.92٪) ، منتجات ألبان مستوردة 14 (77.87٪) ، منتجات ألبان محلية (مصنع) 15 (65،22٪) ، منتجات ألبان مزرعة 20 (66.67٪) وجاموس الحليب الخام 10 (50٪) بينما كانت النتيجة جينIcad 77(64.24٪) بين مجموعتي الحليب ومشتقاته. حليب بقري خام 11 (64.71٪) ، حليب مستورد 8 (61.54٪) ، منتجات ألبان مستوردة 15 (83.33٪) ، منتجات ألبان محلية (مصنع) 14 (60.87٪) ، منتجات ألبان مزرعة 18 (60٪) حليب خام جاموس 11 (55٪).
جميع بكتريا S.aureus لديها القدرة على إنتاج إنزيم بيتا لاكتاماز بطريقة اليود السريع المباشر بالاضافة الى قدرتها على على تكوين الغشاء القوي.

Molecular Characterization Of Staphylococcus aureus Isolated From Milk and Milk products


Summary
Staphylococcus aureus is a pathogenic bacterium-contaminating milk and milk products causing food poisoning primarily due to its enterotoxins Production, it possessed a repertoire of virulence factors, multiple antibiotic resistance and its capability to biofilm formation , in addition to its capacity to gain new resistance genes via integron, which could lead to difficult treatment. For these reasons, the aim of study to determine the prevalence rate ,accurant some virulence pattern and biofilm formation in S,aureus isolated from milk and milk product (mecA ,femA, Icaa and Icad) genes .
Study was conducted to collect a total of 300 samples divided into six groups 50 Samples for each (cow raw milk ,imported milk ,imported dairy products ,locally dairy products (factory) ,farm dairy product and buffalo raw milk),the study was beginning from October 2022 to February 2023. The samples were collected randomly from different locations in Karbala city .The samples were manipulated using bacteriological and biochemical methods for isolation and identification of S. aureus, then biofilm production and antimicrobial susceptibility tests were done. Molecular tools were used to study the prevalence some virulence genes (mecA,femA,Icaa and Icad) and the ability of S.aureus to produce β-lactamase enzyme was examined by rapid iodiometric method.
The result of our study revealed of 300 samples cultured and identified,121 (40,3%), isolates were characterized as S. aureus,it was distributed as cow raw milk 17 (34%),imported milk13 (26%),imported dairy products 18 (36%),locally dairy products (factory) 23 (46%),farm dairy products 30 (60%)and buffalo raw milk 20 (40%). Regarding resistance rates of S. aureus, the isolates were most frequently resistant to penicillin G 61 (50.77%) and oxacillin 49 (40.49%) but more susceptible to ciprofloxacin (100%) gentamycin(100%), Azythromycine 89 (73.66%), Erythromycin 77 (63.24%) ,Tetracycline 52 (42.9%) . Furthermore, the molecular prevalence and percentage of Methacillin resistance antibiotic depending on the detection of the mecA genes was 49 (40,49 %) and remaining 72 (59,50). the molecular prevalence of MRSA among different groups was recorded as, cow raw milk 7(41,17%),imported milk 6 (46,15%),imported dairy products 7 (38,88%),locally dairy products (factory) 9 (39,13%),farm dairy products 12 (40%) and buffalo raw milk 8 (40%) .
The rate of biofilm production in overall S. aureus was 100% this result was divided into three phases (strong, moderate and weak)formation the percentage of these phases among different milk and milk products was ,strong formation 74 (62,5%) moderate formation 28 (22,08%) and weak formation 19 (15,42%)
On the other hand the number and percentage of Icaa gene in all sample of S.aureus was 81 (67.86%) distributed among the study groups it as ; Cow raw milk 12 (70.59%), imported milk 10 (76.92%),imported dairy products.14 (77.87%) , Locally dairy products(factory) 15 (65,22%),farm dairy product 20 ( 66.67%)and buffalo raw milk 10 (50%) while the result was form Icad was 77 (64.24%) among the groups of milk and milk products; cow raw milk 11 (64.71%),imported milk 8 (61.54%),imported dairy products 15 (83.33%),locally dairy products (factory)14 (60.87%),farm dairy products18 (60%)and buffalo raw milk 11 (55%).
All Staphylococcus aureus have ability to produce the beta-lactamase enzyme by a rapid direct iodine method by useing starch-iodine complex and most of strain are strong biofilm formation