الكشف عن جينات السموم المعوية وبعض العوامل المؤثرة على السموم المعوية لعزلات المكورات العنقودية الذهبية في مدينة كربلاء

رسالة ماجستير

اسم الباحث : هبة مهدي محمود موسى

الكلية : كلية العلوم

الاختصاص : علوم الحياة

سنة نشر البحث : 2016

تحميل الملف : اضغط هنا لتحميل البحث

تم جمع 332 مسحة انفية من المتعاملين مع الاغذية العاملين في كربلاء المقدسة. كانت اكبر مجموعة من الشاملين مع الاغذية في هذه الدراسة هم النادلون في المطاعم (95=n) عينة بالإضافة الى ثلاث مجموعات اخرى وهم الطباخين (68=n) وعمال المخابز (66=n) وعمال معامل المياه (59=n).

تم التعامل مع العينات بحسب طرق العمل القياسية للأحياء المجهرية وتم تشخيص العزلات مظهرياً بالاعتماد على الخصائص المزرعية للعزلات والفحوصات الكيموحيوية بالإضافة الى اشرطة API staph وتم ايضا تشخيص العزلات جينيا باستخدام تفاعل البلمرة المتسلسل (PCR) حيث تم استهداف الجين fem A ، تم الحصول على 100عزلة من جرثومة S.aureus من المتعاملين مع الاغذية وشكلت نسبة (%30.1) ,حيث كانت منتشرة بشكل ملحوظ بين عمال حوانيت المدارس (100%), وعمال المقاهي (85.7%) , وعمال معامل الحلويات (71%).

تم استخدام تفاعل البلمرة المتسلسل المتعدد لغرض دراسة امتلاك جينات السموم المعوية لجرثومة S.aureus نوع a,b,c,d, and e .ان عدد العزلات الجرثومية التي اعطت نتيجة موجبة لجينات السموم المعوية كان عددها 38(38%)عزلة من مجموع 100 عزلة وحيث اعطت 16(%16) عزلة نتيجة موجبة للجين sea, و18 عينة (18%) اعطت نتيجة موجبة للجين seb , بينما كانت عدد العزلات الموجبة للجينين seejsec هي 8 عينة (8%), اما بالنسبة للجين  sed فقد كان عدد العزلات الموجبة 6 عزلات (6%).بالإضافة الى ان العديد من السلالات تمتلك جينات لسموم معوية متعددة حيث كان 38% من العزلات موجبة لواحد او أكثر من الجينات ,27% من العزلات موجبة لجين واحد فقط و6% من العزلات كانت موجبة لجينين بينما 4% فقط من العزلات كانت موجبة لثلاث جينات و1 % من العزلات موجبة لخمسة جينات.

أظهرت نتائج هذه الدراسة الى ان عدد كبير من المتعاملين مع الاغذية يحملون سلالات منتجة للسموم المعوية وهذا يشكل خطر على الصحة العامة اذ من الممكن ان تنتقل تلك السلالات الى الاطعمة خلال عملية طهي الطعام وتحضيره او خلال عملية تعليب الطعام.. .الخ ولذلك يجب وضع اليات محددة لفرض منع تسمم الطعام الذي ينتج من انتقال جرثومة S.aureus الى منتجات الطعام.

لغرض دراسة تأثير الظروف الزراعية المختلفة على انتاج الذيفان فأن سلسلة من التجارب قد اجريت، هذه التجارب تشعل ثلاث عوامل وهي (الملح ,الرقم الهيدروجيني والكلوكوز) ولهذا الغرض تم اختيار سلالتين والسلالة الاولى تمتلك جينات لسموم معوية متعددة وبينما السلالة الثانية لا تمتلك اي جينات للسموم المعوية.

وجد ان التركيز العالي من ملح كلوريد الصوديوم (%14,%12) يحفز من انتاج الذيفان لكن يخفض معدل النمو وبالنسبة لتأثير الرقم الهيدروجيني فقد لوحظ ان هناك زيادة في كل من معدل النمو وانتاج الذيفان قرب الرقم الهيدروجيني المتعادل، وتركيز الكلوكوز (2.5%) يحفز من انتاج الذيفان ولكن يخفض معدل النمو.

وطبقا لهذه النتائج فأن الظروف التي لا تدعم انتاج الذيفان هي الرقم الهيدروجيني المنخفض وتركيز ملح كلوريد الصوديوم المنخفض وتركيز الكلوكوز المنخفض.

Detection of Enterotoxin genes and some of Enterotoxin influencing factors of Staphylococcus aureus isolates in kerbala city

Nasal swab samples were collected from 332 food handlers working in Kerbala. The largest group of food handlers included in this study was the

servants in restaurants (n= 95). In addition, there were three additional large groups of food handlers: Chiefs (n=68), Bakery workers (n=66), and Water plant workers (n=59).

The samples were processed according to the standard microbiological procedure. Cultural characteristics, biochemical assays and API staph were used for phenotypic identification of the isolates. Polymerase chain reaction (PCR) targeting femA gene fragment was used for the molecular confirmation of the identification. A total of 100 Staphylococcus aureus isolates were recovered from the food handlers, representing a prevalence of 30.1%. Asignificantly high prevalence of nasal swab carriage of S.aureus were found among the workers of school foods shops (100%), cafes workers, (85.7%), and sweet shop workers (71%).

Multiplex PCR was used to study the prevalence of staphylococcal enterotoxins gene type a, b, c, d and e , the prevalence of enterotoxin genes were 38% among 100 isolates . 16 (16%) were positive for sea, 18(18 %) were positive for seb, 8(8%) were positive for sec and see, 6(6%) were positive for sed.

In addition, many strains were found to possess multiple enterotoxin genes. 27% positive for one gene, 6% Positive for two genes 4% positive for three genes, 1% positive for five genes. These results indicate that a significant numbers of food handlers carry enterotoxigenic strains and thus imposing a risk of transmitting those strain to food during food processing or preparing, packaging etc.

Therefore, a specific measure must be put in place in order to prevent food poisoning which would be the result of transmission of Staphylococcus aureus to food products.

To study the effect of culture conditions on the toxin production series of experiments were done , the experiments include three factors (salt,pH,glucose) . For this purpose, 2 strains were selected. The first one was a possessing multiple enterotoxin genes, whereas the second one did n’t have any of the studied enterotoxin genes.

High Nacl concentration (12%, 14%) were found to induce toxin production but reduce growth rate , whereas near-neutral pH was found to increase both growth rate and toxin production , and glucose concentration (2.5%) were found to induce toxin production but also reduce growth rate.

According to the results, the conditions that are not supportive for toxin productions include low (pH , glucose concentration and Nacl concentration).