تأثير تجميد النطف السريع والإذابة وأضافه مضادات الأكسدة في مستويات الجذور الحرة ومعايير النطف لمرضى قليلي الخصوبة

اطروحة دكتوراه

اسم الباحث : هشام قاسم محمد ألنويني

الكلية : كلية التربية للعلوم الصرفة

الاختصاص : علوم الحياة/علم الحيوان

سنة نشر البحث : 2013

تحميل الملف : اضغط هنا لتحميل البحث

     أنُجزت هذه الدراسة في مختبر الحقن  ألمجهري  وتجميد النطف في مركز الخصوبة في مدينة الصدر الطبية / محافظة النجف ألاشرف , وامتدت الدراسة من المدة أيار 2012 إلى نيسان2013 .

هدفت الدراسة إلى محاولة التعرف على تأثير عمليات التجميد السريع والإذابة في معايير المني و النطف وتركيز ألمالون داي ألالديهايد MDA والنسبة المئوية لكروماتين النطف غير السوي بالإضافة إلى دراسة تأثير إضافة أنواع من مضادات الأكسدة والتي شملت فيتامين E بتركيز       40    والكلوتاثايون Glutathione  بتركيز1  ملي مول إلى وسط تجميد النطف (Sperm Freeze) في تقليل التأثيرات السلبية الناتجة من عمليات التجميد السريع والإذابة في النطف .

    شملت الدراسة ثلاثة أنواع من مرضى عدم الخصوبة وهم مرضى سواء النطف Normozoospermic ومرضى ِقَلة النطف Oligozoospermic و مرضى وهن النطف Asthenozoospermic, وكان عدد المرضى في كل نوع 30 مريضاً.  كان معدل العمر لدى مرضى سواء النطف (  1.31  ± (32.2  سنة و معدل العمر لدى مرضى قلة النطف                  (  1.29 ± 31.1  ) سنة  و معدل العمر لدى مرضى وهن النطف (    1.23  ±  33.1  ) سنة .

    أظهرت النتائج أن عملية تنشيط النطف أدت إلى حدوث فروق معنوية (P<0.05) في معايير النطف مقارنة بقبل التنشيط , إذ أظهرت نتائج هذه الدراسة أن عملية تنشيط النطف باستعمال تقنية الطبقية البسيطة Simple Layer  لعينات مرضى سواء النطف و مرضى قلة النطف أدت إلى انخفاض معنوي (P<0.05) في معدلات تركيز النطف و  تركيز الخلايا الدائرية و تركيز المالون داي ألديهايد  MDA  والنسبة المئوية لكروماتين النطف غير السوي ووجود زيادة معنوية (P<0.05) في كل من النسبة المئوية للنطف ذات الحركة التقدمية والنسبة المئوية لعيوشية النطف و النسبة المئوية للنطف السوية مقارنة مع معدلاتها قبل التنشيط . بينما عملية تنشيط النطف مرضى وهن النطف باستعمال تقنية الغسل والنبذ Centrifugation Wash – Out technique أدت إلى انخفاض معنوي (P<0.05) في معدلات تركيز النطف و تركيز الخلايا الدائرية و النسبة المئوية لكروماتين النطف غير السوي و وجود زيادة معنوية (P<0.05) في كل من النسبة المئوية للنطف ذات الحركة التقدمية والنسبة المئوية لعيوشية النطف و النسبة المئوية للنطف السوية وتركيز المالون داي ألديهايد  MDA مقارنة مع معدلاتها قبل التنشيط .

     أظهرت نتائج الدراسة الحالية أن عملية التجميد السريع لنطف المرضى المشمولين في الدراسة باستعمال وسط تجميد النطف  (Sperm Freeze) , وإجراء عملية الإذابة بعد مرور شهر واحد أدت إلى   انخفاض معنوي (P<0.05) في كل من تركيز النطف والنسبة المئوية للنطف ذات الحركة التقدمية و النسبة المئوية لعيوشية النطف و النسبة المئوية للنطف السوية و حدوث زيادة معنوية (P<0.05) في معدلات كل من تركيز المالون داي ألديهايد  MDA و النسبة المئوية لكروماتين النطف غير السوي وعدم وجود فرقا” معنويا” (P<0.05) في تركيز الخلايا الدائرية مقارنة مع معدلاتها بعد التنشيط .

    أظهرت دراسة مدة التجميد من حساب معايير النطف في الشهر الأول ومقارنتها مع الشهر الثاني والشهر الثالث بعد التجميد والإذابة في عينات المرضى المشمولين في الدراسة وجود انخفاض معنوي (P<0.05) في كل من النسبة المئوية للنطف ذات الحركة التقدمية و النسبة المئوية لعيوشية النطف وحدوث زيادة معنوية (P<0.05) في معدلات كل من تركيز المالون داي ألديهايد   MDA و النسبة المئوية لكروماتين النطف غير السوي وعدم وجود فروق معنوية(P<0.05) في كل من تركيز النطف و النسبة المئوية للنطف السوية و تركيز الخلايا الدائرية في  الشهر الثاني و الثالث مقارنة مع معدلاتها بعد إجراء عملية الإذابة بعد شهر واحد من التجميد .

     كما أظهرت نتائج الدراسة وجود انخفاض معنوي (P<0.05) في كل من النسبة المئوية للنطف ذات الحركة التقدمية و النسبة المئوية لعيوشية النطف و حدوث زيادة معنوية (P<0.05) في معدلات تركيز المالون داي ألديهايد  MDA والنسبة المئوية لكروماتين النطف غير السوي و عدم وجود فروق معنوية (0.05< P) في كل من تركيز النطف و النسبة المئوية للنطف السوية و تركيز الخلايا الدائرية عند مقارنة معدلات الشهر الثالث مع معدلات الشهر الثاني .              .

      وأوضحت نتائج الدراسة إن استخدام وسط تجميد النطف  (Sperm Freeze) مضافا” إلية  مضادات الأكسدة من نوع فيتامين E أو الكلوتاثايون بشكل منفرد أو بشكل مزيج من النوعين أدى إلى حدوث  فروق معنوية (P<0.05) في المعايير المدروسة لنطف المرضى المشمولين في الدراسة حيث أدى إلى زيادة معنوية (P<0.05) في كل من النسبة المئوية للنطف ذات الحركة التقدمية و النسبة المئوية لعيوشية النطف و حدوث انخفاض معنوي  (P<0.05) في معدلات كل من تركيز المالون داي ألديهايد  MDAو النسبة المئوية لكروماتين النطف غير السوي و عدم وجود فروق معنوية (P<0.05) في كل من تركيز النطف و النسبة المئوية للنطف السوية و تركيز الخلايا الدائرية عند مقارنة معدلاتها مع استخدام وسط تجميد النطف  (Sperm Freeze) وحده.

      يستنتج من هذه الدراسة بأن عمليات التجميد السريع والإذابة للنطف تمتلك تأثيرات سلبية في معايير المني و النطف وتركيز ألمالون داي ألالديهايد MDA والنسبة المئوية لكروماتين النطف غير السوي في كل عينات المرضى المشمولين بالدراسة , ويزداد هذا التأثير السلبي لعمليات التجميد السريع والإذابة مع زيادة مدة التجميد , وان إضافة مضادات الأكسدة من نوع فيتامين E أو الكلوتاثايون بشكل منفرد أو بشكل مزيج من النوعين إلى وسط تجميد النطف  (Sperm Freeze)  اظهر مقاومة لهذه التأثيرات السلبية انعكست بحدوث تحسن معنوي في المعايير المدروسة .

Effect of Rapid Freezing and Thawing and Antioxidants addition on Free Radicals levels and Sperm Parameters of sub- fertile Patients

This study was performed in the laboratory of Intra Cytoplasmic Sperm Injection and freezing of sperm in the fertility center of Al-Sader Medical City /    Al-najaf Alashraf City during the period from May, 2012 to April 2013.     The study aimed to study the effect of rapid freezing and thawing processes on semen and sperm parameters, Malondialdehyde concentration ( MDA) and abnormal sperm chromatin percent, besides to study the effect of adding types from antioxidants Including vitamin E in concentrate 40  and Glutathione in concentrate 1 mm to the sperm freezing media (Sperm Freeze) In minimizing the negative effects which result from sperm rapid freezing and thawing processes.

     The study included three types of Infertility patients Normozoospermic, Oligozoospermic, and Asthenozoospermic patients. The Number of patient’s was (30) in each case .  The Mean of age of Normozoospermic patients were (32.2+_1.31) year, Oligozoospermic patients (31.1+_1.29) year and, Asthenozoospermic patients (33.1+_1.23) year. The results showed that the sperm activation processes  lead to a significant difference (p<0.05) in sperm parameters in comparison with these before activation . The present study results showed that sperm activation by using simple layer technique  to patients samples of  Normozoospermic  and Oligozoospermic patients lead to a significant decrease (p<0.05) in sperm concentration, round  cell concentration , Malondialdehyde concentration and abnormal sperm chromatin percent Means  and  a significant increase (p<0.05) in sperm motility forward movement percent , Sperm viability percent and normal sperm morphology percent in comparison with their values before activation  . While the sperm activation processes of Asthenozoospermic patients by useing Centrifugation Wash – Out technique lead to a significant decrease (p<0.05) in sperm concentration, round cell concentration and abnormal sperm chromatin percent Means and a significant increase (p<0.05) in sperm motility forward movement percent, sperm viability percent, normal sperm morphology percent and Malondialdehyde concentration In comparison with their values before activation.   .                                                                                                      The present study results showed that sperm rapid  freezing processes of patients who were included  in the study  by using sperm freezing media ( Sperm Freeze) and  thawing processes after one month from freezing leads to a significant decrease (p<0.05) In the sperm concentration, sperm motility forward movement percent, sperm viability percent and normal sperm morphology percent. and a  significant increase (p<0.05) in the Malondialdehyde concentration and  abnormal sperm chromatin percent and no significant difference(p<0.05)  in round  cell concentration in comparison with their values  after activation .

     Study of  freezing time by calculating sperm  parameters in the first month and compared it with second and third months  after freezing and thawing in the samples of patients who were included  in the study showed  there was a there was a significant decrease (p<0.05) in the sperm motility forward movement percent and sperm viability percent  ,and there was a significant increase (p<0.05) in the Malondialdehyde concentration and  abnormal sperm chromatin percent and no significant difference(p<0.05) in the sperm concentration, normal sperm morphology percent and round cell concentration Means in the second and third month  In comparison with their values after doing the thawing processes after one month from freezing .   The study results shows a significant decrease (p<0.05) in the sperm motility forward movement percent and sperm viability percent  ,and there was a significant increase (p<0.05) in the Malondialdehyde concentration and abnormal sperm chromatin percent and no significant difference(p<0.05) in the sperm concentration, normal sperm morphology percent and round cell concentration when comparing third month Means with  second month Means.                                        .                                                                                                              The study results shows that used of sperm Freezing Media ( Sperm Freeze) with adding antioxidants like  vitamin E or Glutathione in single form or in the mixed form from the tow antioxidants leads to a significant difference (p<0.05) in sperm parameters of study included patients , there was a significant increase (p<0.05) in the sperm motility forward movement percent s and sperm viability percent  ,and  there was a significant decrease (p<0.05) In The Malondialdehyde concentration and  abnormal sperm chromatin percent and no significant difference (p<0.05) In the sperm concentration, normal sperm morphology percent and round cell concentration In comparison with their Means when used of sperm freezing media ( Sperm Freeze) alone .                .                                                            It can be concluded  from this study  that  sperm  rapid  freezing and thawing processes had a negative  effect on the semen and sperm parameters and Malondialdehyde concentration and abnormal sperm chromatin percent in all samples  of study included patients  , and this negative  effect of rapid  freezing and thawing processes increased with increasing of freezing time , and Adding  of antioxidants vitamin E or Glutathione in single form or In the mixed form shows resistance to this negative  effect  leads to a significant increase (p<0.05) In the studying  parameters  .